芽孢杆菌外毒素保护性抗原和上游强启动子穿梭载体的构建.pdfVIP

维普资讯 1546 CHINATROPICALMEDICINEVo1．6No．9September2006 中国热带医学2006年第6卷第9期 [论 著] 芽孢杆菌外毒素保护性抗原与上游强启动子穿梭载体的构建 刘蓉娜 ，黄汉菊 ，徐静华 摘要 ：目的 构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原 (PA)的两种 穿梭栽体与上游强启动子。 方法 将解淀粉芽 孢杆茵的 a一淀粉酶启动子克隆到载体 pb1ueseript—sk(+)上 ，构建载体 pBLKSP；以A16R疫苗株 (Tox+，Cap一，弱 毒株)DNA为模板 ，设计合成 内外侧引物巢式 PCR扩增获得保护性抗原 (PA)的全基 因，先克隆到栽体 pBLKSP，再将 其和质粒 PUB110重组构建成两种 穿梭栽体。 结果 酶切鉴定显示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与 文献报道序列及预计结果一致。 结论 成功构建 了带有强启动子 的两种穿梭载体 。为在无毒炭疽疫苗株 中的高 效表达和炭疽芽孢杆菌的分子疫苗研究奠定了基础。 关键词 ：炭疽芽孢杆茵；穿梭栽体 ；重组 ；基 因 中图分类号：R378．7 文献标识码 ：A 文章煽号 ：1009—9727(2O06)o9—1546—03 Constructionofshuttlevectorofanthrax toxin protectivena tigen witIIupstream strong promoter．LIU Rong—na． HUANGHan—ju，XUJing—hua．(1．DepartmentofPathogenicOrganismofTongjiMedicalCollegeElementarySchool，Huazhong ScienceandTechnologyUnversity，Wuhan430030，Hubei，P．R．China) Abstract：Objective Toconstructtwoshuttlevectorofanthraxtoxinprotectiveantigenwithupstreamstrongpmmo~r． Meth- ods Thepromoterre,onofhtea—amylasegeneofBacillusamyloliquefacienswasclonedintopbluescript—sk(+)vector；thean— thraxtoxinprotectiveantigenwholegenewasma plifiedbynestedPCRfrom A16vaccinesrtaintemplate．Firstlyitwasclonedinto pBLKSPvector，thenrecombinatedwithPUB110vectortoform wtokindsofshu~evectors． Results RestrictionanalysisandDNA esquencingconfimr edthattheclonedgenefragmentsencodedanthrxa toxinprotectiveantigen． Conclusion Twokindsofshuttle vectorshavebeensuccessftdlyconstructed．ithassetfoundationofrfurtherstudy onthe IIighlyeffectiveexpressioninnontoxican— thracissrtainandmoleculevaccinereesarchofBacillus anthracis， Keywords：Bacillus anth