应用自动质谱退卷积定性系统（AMDIS）和保留指数分析马尔康柴胡地上、地下部分与北柴胡挥发油的成分差异.docVIP

应用自动质谱退卷积定性系统（AMDIS）和保留指数分析马尔康柴胡地上、地下部分与北柴胡挥发油的成分差异 　　[摘要] 采用自动质谱退卷积定性系统（automated mass spectral deconrolution and identification system，AMDIS）和保留指数方法分析地方习用品马尔康柴胡地上、地下部分与药典收载北柴胡挥发油GC-MS的总离子流图谱，对其成分进行定性并测定相对含量。结果表明马尔康柴胡与北柴胡挥发油成分种类有一定相似性，均有较高含量的抗炎镇痛活性成分氧化石竹烯，提示马尔康柴胡全草作为地区习用品，用于感冒发热等，具有一定科学依据。 　　[关键词] 马尔康柴胡； 柴胡； AMDIS； 保留指数； 挥发油； 定性； 相对含量 　　柴胡为常用中药，除《中国药典》2010年版收载的2个来源（伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡B. scorzonerifolium Willd.的干燥根）外[1]，柴胡属20余种植物在我国不同地区作为柴胡地区习用品入药[2]。 　　马尔康柴胡B. malconense的干燥全草是《四川省中药材标准》2010年版收载的地方习用品“竹叶柴胡”的来源之一[3]，产自四川阿坝州，主要为野生，因其价格低廉，使用广泛，用量较大。马尔康柴胡与药典收载柴胡不仅品种不同，且药用部位亦不同，但所载功能与主治却和药典收载柴胡基本一致，其科学性有待验证。 　　柴胡挥发油是其疏散退热作用的主要活性成分[4]。本文采用拟自动质谱退卷积定性系统（automated mass spectral deconrolution and identification system，AMDIS）和保留指数分析方法，对马尔康柴胡地上、地下部分的挥发油成分与北柴胡进行比较研究，为马尔康柴胡是否具有柴胡治疗感冒发热的物质基础，且其地上、地下部分是否可同等入药提供科学依据。 　　1 材料 　　Agilent 7890A/5975C GC-MS 气相色谱质谱联用仪，色谱柱HP-5MS 5% Penyl Methyl Siloxane（0.25 mm×30 m，0.25 μm），质谱图匹配的谱库 NIST08 MS database，匹配一化学工作站MSD ChemStation E. 02.01.1177，AMDIS（美国安捷伦公司）。正己烷、无水硫酸钠为分析纯，C8-C20系列正构烷烃标准溶液（mixture no. 04070）购于Fluka Chemika。 　　马尔康柴胡药材由作者采自四川省阿坝州汶川县，北柴胡购自成都市北京同仁堂药店，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定前者为马尔康柴胡B. malconense的全草，后者为柴胡B. chinense的干燥根。 　　2 方法 　　2.1 挥发油提取方法 取药材粉末（过2号筛）各50 g，置于1 000 mL圆底烧瓶中，加蒸馏水300～500 mL，浸泡2 h。随后安装挥发油提取器，加热回流6 h，得淡黄棕色澄明油状液体，静止1 h，后读数（mL）。加入2 mL正己烷稀释后，转移出来。加入适量无水硫酸钠，于5 ℃静置24 h脱水。将脱水后的挥发油装于螺口小瓶密闭，于5 ℃保存，以备测定。 　　2.2 GC-MS测定方法 色谱条件：初始温度40 ℃，保持3 min，以8 ℃?min-1的速率升至120 ℃，以2 ℃?min-1的速率升至200 ℃，以6 ℃?min-1的速率升至260 ℃，保持3 min。载气为He，流速1 mL?min-1。分流比20∶1，进样量1 μL。进样口温度280 ℃，溶剂延迟4.00 min。质谱条件：电离方式EI源，电子能量70 eV，离子源温度230 ℃，扫描范围50～400，扫描速度2.11 s?dec-1。测定北柴胡（根）与马尔康柴胡地下、地上部分的总离子流谱图（TIC），见图1～3。 　　3 数据分析方法 　　3.1 重叠峰拆分 中药挥发油成分复杂，应用GC-MS分析挥发油得到的TIC图谱中存在大量的重叠峰。工作站软件中带有AMDIS，它基于模型峰的算法，把性状与保留值完全相同的碎片峰重新组合，去掉其他的干扰峰，进而构建一张比较“纯净”的谱图[5]。这种提纯谱图的功能，可以有效的拆分重叠峰，进而准确的对化合物定性。 　　选择某一段TIC谱图，运行AMDIS，可初步得出这段TIC中化合物数目，对应各化合物特征碎片峰可将重叠峰进行分离。然后对相应扫描点的提纯谱图与图谱库对应的匹配化合物进行比对、分析，确定其结构[6]。 　　举例说明，见图4，由图4-a可见，通过运行AMDIS的run命令后，18.51～18.73 min有7个化合物；选择18.560 min处对应化