五种中药体外抗弓形虫抑制效果研究.pdfVIP

进行比对，从中选择检测效率相对高的方法开展普查，最大限度的使调查结果贴近真实。另外，对 于阳性样品最好还要用另一种方法进行复核。 本实验选择三种市场中的弓形虫抗体检测试剂盒：深圳康百得的猪弓形虫抗体检测试剂盒，珠 海海泰的动物弓形虫IgG抗体检测试剂盒，兰州兽医研究所的弓形虫间接血凝试剂盒，还有本实验 室自建的改良凝集实验检测方法，对其进行了比较分析。 评价检测方法的指标除了常用的检测效率，还增加了Youden指数。Youden指数是分析敏感性 和特异性的综合评价指标，可以避免对于敏感性和特异性的偏移，较客观的反映实际情况。 深圳康百得猪弓形虫抗体检测试剂盒建议血清稀释倍数为100倍，但是在试验过程中我们发现， 100倍稀释检测的结果与其他三种方法检测结果具有极显著性差异，检测效率和Youden指数显著低 于其他方法，检测价值低。我们加大血清稀释倍数，改为200倍，检测结果与其他三种方法无显著 性差异。敏感性，特异性和检测效率都到达90％以上，Youden指数达到0．85。可以用来进行大规模 的流行病学调查和临床诊断。 检验，与上述三种方法检测结果之间没有显著性差异。敏感性为60％，特异性高为88．3％，检测效 率为81．25％，可作为初步血清学筛查后核实阳性样本所用。 五种中药体外抗弓形虫抑制效果的研究 王权1，蒋蔚1，荆振宇1，陈永军1，杨康1，宋宁宁1，崔常勇2 t1．中国农业科学院上海兽医研究所。上东蕾出入境检验检疫局。山东2257091) 摘要：探索治疗弓形虫病的有效药物组方，从而为临床合理用药提供科学的指导， 通过体外试验， 培养Aria．1细胞作为弓形虫宿主细胞，采用MTT法测定了甘草、黄芩、百部、苦参和贯众5种中 药对细胞的安全浓度，将弓形虫RH株速殖子与Ana-1细胞在含不同浓度药物的细胞培养液中共同 培养，在加药后第4，8，12，24，48小时，观察细胞和弓形虫的生长状态和形态，选取第48小 时观察药物体外抑制虫体增殖的效果，并以磺胺嘧啶钠作为阳性药物对照。结果显示，黄芩、百 部、甘草可显著抑制弓形虫的增殖，而贯众和苦参效果不佳。 关键词刚地弓形虫； 中草药； 体外； 抑制 基金项目l公益性行业(农业)科研专项经费项目资助(200803017) 作者简介i王权，男，硕士，副研，主要从事人畜共患病快速检测技术研究，Email：wqlcn@yahoo．con．cn 刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，是一种常见的入兽共患病病原，目前临床上治疗弓形 虫病主要以西药为主，如乙胺嘧啶，磺胺嘧啶等。虽然这些药物对急性感染者体内速殖子的杀灭和 抑制有明显的作用但同时也存在毒副作用大，作用时间长，且无法控制弓形虫脑炎，妊娠期感染 所致胎儿病变及免疫缺陷患者的弓形虫病等缺点。因此，寻找能够控制弓形虫病并且具有低毒性、 低残留、副作用小的药物迫在眉睫。中药是我国医药学的瑰宝有毒副作用小，低残留的优点，但目 65 前仅有少量的中草药用于体内体外抗弓形虫试验的报告。因此本试验拟利用中草药的降热，免疫增 强作用与抗弓形虫作用均佳的药物组成复方制剂，对具有降热，免疫增强作用的药物进行抗弓形虫 试验， 以期筛选既有良好特性作用又有抗弓形虫作用的中草药。 1材料与方法 牛血清，购自Gibco公司。 1．2试验药物甘草、黄芩、百部、苦参和贯众提取物购于河南中冠药业有限公司，使用前用10％ 胎牛血清的RPMll640培养基稀释至适当浓度，然后再用0．229m微孔滤膜过滤除菌。 1．3弓形虫虫株复苏及扩增 弓形虫RH株由上海兽医研究所保存。从液氮中取出虫种，迅速 置于37。C的温水中复苏，经腹腔接种昆明小鼠，3--4d传代一次，连续传代2．3次，毒力恢 复后，将虫体用生理盐水重悬并稀释至5×105个／mL。按0．2mL／只剂量再次接种3天后收集 腹水，用于体外弓形虫药物筛选试验。 1．4巨噬细胞(Ana．1)的培养巨噬细胞购于中国科学院上海生科院细胞资源中心，由本室 于液氮中保存。从液氮中取出并复苏，采用常规传代细胞培养2周后，当细胞长满瓶底，用 lxl05个／mL。 1．5细胞毒性实验本实验使用MTT法，每种药设实验组(加入药物组)、实验对照组(不加入药 物组)和空白对照组(无巨噬细胞组)，取对数期生长的Aria-1细胞，用吸管吹打成单个细胞悬液， 孔，空白对照组孔仅加入100ul10％FBS的RPMI