基于化学成分相互作用探讨芫花与甘草配伍禁忌的机制.pdfVIP

科学内涵至今还未有定论。目前对中药配伍禁忌的研究主要集中于文献挖掘、物质基础、生 物效应等方面。从物质基础角度研究是揭示其科学内涵的重要组成部分, 中药配伍禁忌反药 组合可能通过药物相互作用促使毒性物质的释放增加或使其物质组成改变而增毒或降低药效 导致配伍相反 [1-2] 。 迄今，对中药“十八反”藻戟遂芫俱战草中芫花-甘草反药组合的研究主要是基于药物体 内吸收、肝药酶代谢等方法评价两药合用对药效的影响和导致毒性的特点等[3-5]，对于其化学 [6] 成分变化及配伍规律的研究较少 。本文以芫花-甘草反药组合为研究对象，采用超高效液相 色谱串联四级杆飞行时间质谱 (UPLC - Q - TOF / MS) 与超高效液相色谱串联三重四级杆质 谱 (UPLC - TQ / MS) 两种液-质联用技术相结合的手段，发挥各自的定性与定量优势，探讨 芫花/醋芫花与甘草在不同配比组合水煎过程物质相互作用导致化学成分组成的变化及其特 点，为揭示反药组合“相反”的化学本质提供科学依据，为从物质基础角度研究评价中药配 伍禁忌提供思路和方法。 1. 材料与方法 1.1 实验仪器和材料 Acquity 超高效液相色谱仪，Synapt Q – TOF 质谱仪，Xevo TQ 质 谱仪，Masslynx 及 Markerlynx 软件 (美国 Waters 公司)。 乙腈 (色谱纯，Fisher Scientific 公司)；甲酸 (分析纯，Merck 公司)；超纯水 (自 制)；醋 (恒顺陈醋，总酸 ≥ 4.50 g / 100 mL，批号 。氯霉素、克拉霉素对照 品 (批号 110555 – 200602、130356 – 200403) 购自中国食品药品检定研究院，芫花酯甲 等 15 个对照品为实验室自制。 芫花产自安徽省六安市吴家店镇，甘草产自宁夏灵武市美康甘草基地，由南京中医药大 学段金廒教授鉴定，分别为瑞香科植物芫花 Daphne genkwa Sied. et Zucc.的干燥花蕾和豆 科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎，标本收藏于南京中医药大学江 苏省方剂高技术研究重点实验室样品室。醋芫花按照《中华人民共和国药典》2010 版附录 II D 项下醋炙法炮制。 1.2 对照品溶液的制备 精密称取氯霉素、克拉霉素对照品适量，以甲醇溶解制成质量浓度 -1 -1 分别为 20.4 和 1.21 µg•mL 的对照品溶液。其余对照品制成质量浓度约为 1 µg•mL 的对照 品溶液。 1.3 供试液的制备 样品提取 精密称取芫花/醋芫花、甘草药粉 (过 40 目筛)，按以下多种比例混合均匀 (3: 40、3: 20、3: 12、3: 10、3: 6、3: 5、3: 4、3: 3、3: 2 和 3: 1，g•g-1)，加 10 倍量水， 浸渍 30 min，水浴回流 2 h，过滤。按各药混合提取时的加水量及提取过程，分别制备不同 加水量的芫花/醋芫花、甘草单独提取液，过滤，得各滤液。 供试液的制备 取芫花/醋芫花-甘草 (1: 1) 滤液 1 mL，同比例加水量的芫花/醋芫花、 甘草单煎 1: 1 混合液 1mL，均加甲醇定容至 25 mL，摇匀，0.22 μ m 滤膜滤过，得各供试液 A 系列。 取各滤液 1 mL，加氯霉素内标液 1 mL，甲醇定容至 25 mL，摇匀，0.22 μ m 滤膜滤过， 得各供试液 B 系列。 取各滤液及芫花/醋芫花、甘草单煎 1: 1 混合液 50 mL，加二氯甲烷萃取，挥干二氯甲 烷，甲醇定容至 5 mL，取其中 3 mL，加克拉霉素内标液 1 mL，甲醇定容至 5 mL，摇匀，0.22 μ m 滤膜滤过，得各供试液 C 系列。各供试液均平行制备 3 份。 1.4 色谱条件 Thermo C18 柱 (100 mm ³ 2.1 mm，1.7 μ m)，流动相为 0.1% 甲 酸水 (A) 和乙腈 (B)。梯度洗脱条件 1：0 min，10 % (B)；6～10 min，25 % (B)；12 min，40 % (B)；20 min，50 % (B)；26 min，95 % (B)；28～29 min，95 % (B)；30 min， 100 % (B)；梯度洗脱条件 2：0