瘦素在着床前小鼠胚胎中的表达及其对胚胎发育的影响.pdfVIP

维普资讯 第 30卷第 14期 第 军 医 大 学 学 报 Vo1．30．No．14 1316 2008年 7月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE Ju1．2008 文章编号：lO0O-5404(2008)14-1316．03 瘦素在着床前小鼠胚胎中的表达及其对胚胎发育的影响 高立芳，赵邦霞，谭冬梅 ，何明忠，谭 毅 (重庆医科大学实验动物中心，重庆400016) 摘 要：目的 探讨瘦素(1eptin)在围着床期小鼠胚胎 巾的表达规律和分布情况以及 leptin抗体对小鼠胚胎体外发 育的影响。方法 雌性NIH小鼠超排后与雄 鼠交配，分别在妊娠 1～4d上午从输卯管或子宫角冲取相应时期的胚胎，用 于以下实验：①分别提取总RNA，检测胚胎巾leptinmRNA表达情况。②采用免疫荧光技术，观察 leptin蛋白在囊胚的表 达和分布情况。③将 8一细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度 leptin抗体的培养液中，观察囊胚形成及脱透明带的情况。结果 leptinmRNA仅在囊胚期特异性表达，其余各时期胚胎未见表达；leptin蛋白在囊胚的滋养层细胞和内细胞团的细胞质和 细胞膜呈阳性表达，而在细胞核无表达。一定浓度的leptin抗体可明显降低囊胚的形成率 (1：400，P0．05)和脱带率 (I：I600，P0．05)，且随着抗体浓度的增加，这种抑制作用更明显。结论 leptin能促进着床前胚胎发育，同时也可能参 与了胚胎着床过程 。 关键词：瘦素；胚胎发育；免疫荧光 中图法分类号：Q95—33；Q954．4 文献标识码 ：A Leptin expression in mouse pre-implantation embryos and its effecton embryo development／n vitro GAO Li—fang，ZHAO Bang—xia，TAN Dong—mei，HE Ming—zhong，TAN Yi(LaboratoryAnimalCenter，ChongqingMedical University，Chongqing400016，China) Abstract：Objective Toinvestigatetheexpressionanddistributionofleptininpre—implantationembryo， anditseffectonmouseembryodevelopmentinvitro．Methods AdultNIH femalemiceweresuperovulated andthenmatedwithfertilemalesofthesamestrain．Onthemorningof1stto4thdofpregnancy，theoviduct andhorn ofuterusweredissectedoutandflushedwithDMEM ／F12medium adequately．Theembryoscollected weresubjectedtothefollowingprocedures：①TotalRNAwasisolatedfromembryosofeachstagerespectively andmRNAexpressionofleptinwasdetectedbyRT—PCR．② Immunofluorescencestainingwasperformedon blastocyststoanalyze theexpression and thedistribution ofleptin protein underlaserconfocalmicroscope． ③Ei