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苹果树腐烂病高效杀菌剂的筛选 　　摘要：以抑菌率为指标，测定了22种药剂对苹果树腐烂病的抑菌效果，从而筛选出各药剂的最佳浓度，并利用聚类分析选出最佳药剂。结果表明：试验所选用的22种供试药剂，多粘类芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌浓度为18 μL/（100 mL）时抑菌效果达到100%；多抗霉素、丙环唑、戊唑醇、咪鲜胺、苯醚甲环唑的浓度分别为22.5 mg/（100 mL）、60 μL/（100 mL）、75 μL/（100 mL）、75 μL/（100 mL）、60 mg/（100 mL）时，抑菌效果达到100%。枯草芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、多抗霉素、苯醚甲环唑、丙环唑、戊唑醇、咪鲜胺、苯丙?甲环唑抑菌效果最好 　　关键词：苹果树腐烂病；杀菌剂；生物药剂；抑菌率 　　中图分类号：S 482.2文献标识码：A文章编号2014 　　苹果树腐烂病是一种发生普遍而又危害严重的病害，不仅造成苹果产量和品质的下降，严重时还造成死树和毁园，给苹果产业带来很大的损失[1]。据报道，20世纪70年代后期开始，该病在河南省的发病区域逐年扩大，发病率显著上升，发病程度不断加重[2]。2005年对陕西省关中地区苹果树腐烂病的调查结果表明，腐烂病在关中各苹果产区均有不同程度的发生，发病率最高达到了92%[3]。晚秋低温来的早，冬季温度过低，春季转暖时骤然降温，树皮易于发生冻裂或木质部分离，致使果树树势大大衰弱，为病菌的侵入创造了良好条件[4]。而低温对花芽和休眠枝条的伤害，也使得树体易被病菌侵染[5-7]。 　　目前市场上用于防治苹果树腐烂病的农药很多，但是大多没有提供最佳浓度供果农参考。近年来，丙环唑与过氧乙酸、甲基硫菌灵的研究比较多[8]，福美胂和菌毒清等药剂，防病效果不是很理想且为果树禁用药。为了给果农提供针对苹果树腐烂病的杀菌剂及适宜的浓度，挑选出22种较新的杀菌剂，对苹果树腐烂病的抑制作用进行测定及筛选，旨在为田间药剂试验和生产应用提供理论依据。 　　1材料和方法 　　1.1供试材料 　　苹果树腐烂病病原菌（Valsa ceratosperma）来自田间发病枝干上新鲜组织，由甘肃农业大学草业学院徐秉良教授提供。分离纯化所得第1代菌种，于4 ℃下冰箱保存备用[9]。 　　供试药剂及使用浓度参考产品说明并经过初试后所得（表1）。（1）生物类杀菌剂：苦参碱，浓度梯度设为25、50、100、200、500 μL/（100 mL），多粘类芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、多抗霉素，浓度梯度设4.5、9、13.5、18、22.5 mg/（100 mL）。（2）唑类杀菌剂：苯醚甲环唑、丙环唑，浓度梯度设7.5、15、30、60、120 mg（μL）/100 mL），甲基硫菌灵，浓度梯度设25、50、100、200、500 mg/（100 mL），苯甲?丙环唑、戊唑醇、咪鲜胺，浓度梯度设15、30、45、60、75 mg/（100 mL），腈菌唑、氰霜唑、己唑醇、?霉灵，浓度梯度设25、50、100、200、500 μL/（100 mL）；（3）取代苯类杀菌剂：嘧霉胺，浓度梯度设7.5、15、30、60、120 mg/（100 mL），百菌清、辛菌胺、达科宁，25、50、100、200、500 mg（μL）/（100 mL）；（4）其他：二氰蒽醌、氯溴异氰尿酸、过氧乙酸，浓度梯度设7.5、15、30、60、 　　表1试验用化学药剂和生物药剂 　　Table 1Tested chemical and biological agents 　　120 mg（μL）/（100 mL），噻菌铜浓度梯度设25、50、100、200、500 μL/100 mL）。 　　1.2试验方法 　　利用PDA培养基进行苹果树腐烂病病菌的活化、培养、保存以及药剂试验。在超净工作台中用灭菌后的接菌针将苹果树腐烂病原接种到PDA培养基上活化，在25 ℃的恒温箱培养4 d，然后重复上述步骤进行纯化，纯化所得的病菌即病原菌[9]。 　　采用含药平板法。将不同浓度的供试药剂加入100 mL灭菌后稍微冷却的PDA培养基中充分摇匀，倒入培养皿中。待培养基冷却后在病原菌边缘打取直径为0.7 cm菌饼，接种到含药平板中央，每皿一块菌饼，贴好标签用密封带密封。每种药剂每个浓度设3个重复，以无菌水作为空白对照。置于25 ℃恒温培养箱中培养4 d后采用十字架交叉法测量菌落直径，计算抑菌率。 　　抑菌率%=（对照菌丝生长直径-处理菌丝生长直径）/对照菌丝生长直径×100% 　　2结果与分析 　　2.1生物类杀菌剂对苹果树腐烂病的抑菌效果 　　4种生物类杀菌剂在供试浓度范围内对苹果树腐烂病菌菌丝均有不同程度的抑制作用，随着浓度的增加其抑菌效果显著增加（