利用SUMO表达系统高效可溶性表达鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因.pdfVIP

第 33卷 第 3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．33．NO．3 2011年 3 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Mar． 2Oll doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．03．08 利用 SUMO表达系统高效可溶性表达 鸡传染性法氏囊病病毒 VP3基因 曲 果，尹杰超 ，李 宁，刘生伟，傅俊华，姚文兵 ，谷学佳 ，郝建权 ，任桂萍，李德山 (东北农业大学 生命科学学院 ／生物制药教研室，黑龙江哈尔滨 150030) 摘 要：为评价 SUMO原核表达系统(pHisSUMOExpress)对病毒基因的可溶性表达，本研究从人工接种发病 的鸡传染性法氏囊病(IBD)的病料组织样品中提取总RNA，通过 RT—PCR扩增 IBD病毒(IBDV)VP3基因，并将其 克隆于pHisSUMO 中构建了重组表达质粒 pHisSUMO—VP3，转化大肠杆菌Rosetta(DE3)PlysS，经IPTG诱导，得 到可溶性表达的融合蛋白SUMOVP3。结果表明，该融合蛋白表达量 占细菌总蛋白35％，经HisTrapMTFFcrude column层析柱纯化后的SUMO。VP3蛋 白可被 SUMO蛋白酶 I有效切割，获得无标签的vP3蛋 白，经westernblot 鉴定表 明该VP3蛋白具有 良好的抗原性。本研究表 明pHisSUMOExpress表达 系统是高效可溶表达外源蛋白的有 效工具，所表达的病毒蛋白具有 良好的抗原性，为病原诊断抗原的研究和制备提供有效表达系统。 关键词：SUMO；高效可溶表达；鸡传染性法氏囊病病毒；VP3基因 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(201l103—019904 UseoftheSUMO expressionsystem toefficientlyexpressthe solubleVP3proteinofinfectiousbursaldiseasevirus QULi，YINJie—chao，LINing，LIUSheng—wei，FUJun—hua，YAOWen—bing， GUXuedia，HAOJian—quan，RENGui—ping，LIDe—shan (Biopharmaceuticallaboratory，CollegeofLifeScience，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：Efficientexpressionofthesolubleviralproteinsisimpo~antforvirologystudies．Theaim ofthisstudyistoutilize thepHisSUMOexpressionsystemofrefficientexpressionofsolubleVP3geneofinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)．Thetotal RNA ofIBDV wasusedastemplatetoclonetheVP3genebyRT—PCR technology．TheVP3genewasclonedintopHisSUMO expression vectorto consturcttherecombination expression vectorpHisSUMO—VP3．High yield and soluble VP3 protein are expressedbypHisSUMO system．Thefusion proteinscouldbe efficiently cleavedby SUMO protease—Ito obtain pureand de—taggedrecombinantproteins．Thissystem providesaneffectivemethodofrviursprotein