西农萨能奶山羊脂联素受体1(AdipoR1)基因CDS区的克隆及其序列分析.pdfVIP

遗传育种 全国养羊生产与学术研讨会议论文集 167 的克隆及序列分析 赵旺生，罗 军，郝娟 (西北农林科技大学动物科技学院 陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌712100) 摘要：根据GenBank已收录的牛(Bosto眦rus)、A．(Homosapiens)和小鼠(Musmuscu／us)等物种脂联素受 山羊A却嘏1基因的CDSIg序列，其全长1 128bp，编码375个氨基酸。经氨基酸序列分析发现，山羊与牛、 小鼠、猪和人的AdipoRl的相似性较高，均在95％rX上。经蛋白质结构分析表明，其蛋白质的分子量为 42．44KDa，等电点为7．19，含7个跨膜结构域。并且整个序列中不舍信号肽。 关键词：西农萨能奶山羊；脂联素受体基因；基因克隆 1．1材料 脂联素(adiponectin)是来源于脂肪组织的脂肪细 胞因子之一，具有抗炎、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化和 1．1．1 实验样品 试验样品采集于陕西省杨凌屠宰 增敏胰岛素的作用，其循环浓度在内脏型肥胖、胰岛素 场，选用3只4周岁体况良好、体重相近且均处于泌乳盛 抵抗或2型糖尿病患者中均降低。脂联素通过增强游离 期的西农萨能奶山羊。早晨常规屠宰后，立即采集乳腺 脂肪酸(freefattyacid，n’A)氧化提高肌肉和肝中胰组织2g左右，用DEPC灭菌水洗净样品表面残留的血 岛素的敏感性，间接证据显示其可能有保护胰岛B细 液及杂质，迅速投入液氮中保存备用。 胞的功能。脂联素的这些效应必须通过脂联素受体的 介导。2003年Yamauchi等应用分子克隆技术确定脂联 素受体存在鼹种异构体。分别称为脂联素受体l(Adi．BufferII及dN吼等购自大连宝生物工程有限公司 poRl)和脂联素受体2(AdipoR2)。acUpoRl对球形脂联 素有高度亲和性，但对全长型脂联素的亲和性则很低， 而Ad咖oR2对球状和全长腊联素均是中度亲和力。根生化科技有限公司。 1．2方法 Inukai等认为胰岛素砌dipoRl的表达有抑制作用。在 h 用C2C12骨骼肌细胞的体外实验中。胰岛素作用24 后AdipoRl的表达减少了约60％。Chinetti等观察到人脐 静脉内皮细胞中有Ad／poRl的表达．内皮细胞高表达 AdipoRl，提示它可能介导球状脂联素保护内皮细胞的BLAST／)，找出该基因在不同物种间的保守区域，利用 作用。 PrimerPremier 6软件设计特异性克隆引物， 5．0和Oligo 上游引物ADS1：57 37；下游 迄今为止，关于AdipoRl基因的研究主要集中于 人、猪以及模式动物小鼠上，对于山羊A却胡l基因调 弓l物ADAl：57 节脂肪酸代谢的研究尚无资料报道。本研究旨在通过 1．2．2 RNA提取与cDNA合成采用Trizol法提取各组 织总RNA。加入DNaseI去除可能存在的基因组DNA， 西农萨能奶山羊J4却积l基因的CDS区克隆，为该基因 下一步eDNA全长的克隆及功能的初步研究奠定基础。 将所提取的总RNA进行分装。一部分于一80℃保存备 1材料与方法 用，另一部分用于进行紫外分光光度仪测定和琼脂糖 RT 基金项目：国家高科技发展计划(髓3)项目(NO．2008AAIOZl35)