绞股蓝、生山楂水提物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织SREBP-1c、PPARα水平的影响.pdfVIP

脂肪性肝硬化的转化进程中，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是两者的中问阶段，因此，开展对 NASH治疗的研究是目前国内外肝病界研究的热点之一。 NASH目前尚无特效治疗药物，大量临床及实验研究资料表明，中医药在此病的治疗上有一定 优势。本研究旨在通过观察绞股蓝、生山楂水提物对NASH模型大鼠肝脏病理及肝功能、血脂， mRNA表达水平的影响，探讨 肝组织中SOD活性、MDA及TC含量、肝组织SREBP．1c、PPARa 绞股蓝、生山楂水提物治疗NASH的疗效及作用机制。 l材料与方法 1．1实验动物清洁级雄性SD大鼠40只，体重120土59，适应性喂养一周后用于实验。 1．2药物绞股蓝、生山楂中药饮片(比例为3：2)购自北京中医药大学东方医院门诊中药房， 由北京中医药大学中药学院加工熬制，制取含生药o．89／ml浓度的水提液。易善复胶囊(228mg／靛2， 北京赛诺菲安万特制药有限公司生产，批准文号：国药准字。以上药物以0．5％羧甲基纤 维素纳溶液配制成所需浓度混悬液，冰箱储存以备灌胃使用。动物给药容积按lml]1009给药。 生北控股份有限公司生产)：荧光定量PCR试剂盒(北京泽平生物技术有限公司)，Trizol试剂盒 DNA Ladder(北京全式金生物技术有限公司)。 (Promega公司)，DEPC(Sigma公司)，lOObp 触f1G(ⅪC11’GT℃从TGI函～ACT·3’．产物：157bp； AACGGAl胤An’GTGl’GAC一3’，产物：138bp； G(圮筒rGGACTGl℃G1℃ATGA．3。，产物：128bp。 1．4 NASH模型的建立大鼠每天予以高脂饲料(88％普通饲料+10％猪油+2％胆固醇)喂养， 连续10周建立NASH模型大鼠。其中胆固醇购自国药集团北京化学试剂有限公司(批号：100616)， 高脂饲料由北京科澳协力饲料有限公司加工制作。 1．5实验动物分组及给药方法：40只SD大鼠中随机选择lO只作为正常对照组，喂以普通饲 料，其余30只喂以高脂饲料，持续10周，期间自由饮水，建立大鼠NASH模型。10周后，皆恢 复普通饲料喂养，将此30只大鼠随机分成3组，即模型对照组、中药治疗组、易善复治疗组，每 组各lO只。按照以下方法灌胃4周：正常组及模型组均给予0．5％羧甲基纤维素纳溶液10ml／kg．d 灌胃，每日1次；中药治疗组给予绞股蓝与生山楂水提物混悬液39／(kg．d)灌胃，每日1次：易 善复治疗组给予易善复混悬液0．16kg／(kg．d)灌胃，每日1次。两组给药量相当于临床成人日用量 的7倍(根据前期实验结果测定)。实验动物自由饮水和进食，分5只一笼饲养于(25士2)‘C的动 物实验室内，明暗交替各12h。 1．6肝组织病理学检测大鼠肝组织冰冻切片，行常规油红O染色；肝组织石蜡切片，行常 规HE染色，油红O及HE染色切片光镜下评估脂肪变性及炎症活动情况。NASH的病理诊断标准 采用“亚太地区非酒精性脂肪性肝病诊断与治疗共识”推荐的美国国立卫生研究院NASH临床研究 网络病理委员会2005年所定指南，NAS组织学评分系统对14项病理改变．3项指标进行了半定量 ·279· 系统进行观察和摄片。 1．8肝组织SOD、MDA及TC测定超声粉粹机制备肝匀浆，取1％肝匀浆，离心后取上清， 按试剂盒操作方法测定SOD活性。同样方法取肝匀浆上清液0．1ml，按试剂盒操作方法测定MDA 水平、肝组织TC水平。 1．9脂质代谢相关因子的测定方法(1)组织总RNA提取物的获取：将组织从液氮中取出，放入 预冷的研钵中加入液氮进行快速研磨，然后将粉末装入预冷的EP管中。每管加入lmlTrizol，用枪吹 打数次，室温放置5mm。文以0．2ml／mlTrizol的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15 秒，待充分乳化溶液呈乳白状，室温放置二3min。b．4℃12000xg离心15mm。离心后溶液分为三层， 由下至上为：淡粉的酚仿层、中间白色蛋白层和澄清的水相，RNA在水相中，约50091．c．取上层水相 于一新的离心管，按0．5ml／ml RNA沉淀后呈胶状片层。e．弃上清