分子排阻色谱法检测胰岛素中的大分子蛋白质.pdfVIP

第 22 卷第 4 期 徐 州 工 程 学 院 学 报 2 007 年 4 月 V ol. 22 N o. 4 Jou rn al of X uzhou In st itu te o f T echno log A PR 1 2007 分 子 排 阻 色 谱 法 检 测 胰 岛 素 中 的 大 分 子 蛋 白 质 耿　莉, 安丽娟 (江苏万邦生化医药股份有限公司, 　江苏　徐州　22 1004) 　　【摘　要】　 中国药典规定, 用柱色谱法对胰 岛素 中的大分子蛋 白进行测定, 但所检测出的含量 只能是一个相对准确值, 重现性较差, 出现偏差时也无法判断. 文章通过柱色谱法及分子排阻色谱 法两种方法对胰 岛素 中的大分子蛋 白质进行定量的测定 比较, 认为可 以用分子排阻色谱法代替柱 色谱法检测胰 岛素 中的大分子蛋 白质, 并提交国家药典委员会, 建议使用. 【关键词】　胰岛素; 大分子蛋 白质; 柱色谱法; 分子排阻色谱法 ( ) 【中图分类号】　K 92711　【文献标识码 】A 【文章编号 】16 7320704 200 7 0420 050203 胰 岛素是 由动物 ( 牛、猪) 胰脏提取 的一种分子量为 56kD 的酸性蛋 白质, 其 中含有胰 岛素原、胰高血糖 [ 1] 素、脱酰胺胰岛素和其他胰腺细胞中的蛋 白质或多肽等 . 以上不纯物质大多为分子量大于胰 岛素 的蛋 白 质, 不仅对人体增加抗原性, 而且还影响胰 岛素的生理作用, 临床上则易出现过敏反应和其它副作用, 增加对 胰岛素的需要量. 生产过程 中, 可通过凝胶过滤和离子交换层离等方法除去上述杂质, 使纯度达 98%. 单组分胰岛素的纯 度达 99 % , 可 降低血循环中胰岛素抗体产生 的机率, 减少皮肤过敏反应的发生, 使注射处皮下脂肪萎缩的机 会明显减少. 为保证患者的安全用药, 中国药典规定, 对胰 岛素的大分子蛋白用柱色谱法测定, 不得超过 1% [2 ]. [ 3 ] 柱色谱法是将 固定相装入玻璃柱 内, 使样品随流动相沿一个方 向移动而达到分离的方法 . 分子排阻色 [4 ] 谱法是根据待测组分的分子大小进行分离的一种液相色谱技术, 分离原理为凝胶色谱柱 的分子筛机制 . 本 试验采用 的是高效分子排阻色谱法, 用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱, 注入的供试品被流 动相带入柱内进行分离. 两种方法分离后的各成分均先后进入检测器, 用数据处理装置记录色谱 图并进行数 据处理, 得到测定结果. 在对胰 岛素 的大分子蛋 白进行检测时, 分别采用柱色谱法与分子排阻色谱法, 以比较两种方法 的优缺 点. 1　仪器和试药 ( ) 葡聚糖凝胶 G - 5 0 超细型 凝胶柱; HD - 2 1- 88 核酸蛋 白检测仪;N 2 000 色谱数据工作站; 恒流泵; 冰 醋酸为分析纯; 大连江 申L C- 10UV 高效液相色谱仪及其工作站;