槲皮素对溶菌酶淀粉样纤维化的抑制作用.pdfVIP

第 28卷第 2期 徐 州 工 程 学 院 学 报 (自然 科 学 版 ) 2013年 6月 Vo1．28No．2 JournalofXuzhou InstituteofTechnology (NaturalSciencesEdition) Jun．2013 槲皮素对溶菌酶淀粉样纤维化的抑制作用 严向阳，邢艳菲，李文涓，曾成鸣 (陕西师范大学 化学化工学院，西安 710062) 摘要：通过研究槲皮素抑制溶菌酶淀粉样纤维化及纤维的细胞毒性发现，槲皮素能够抑制溶菌 酶的淀粉样纤维化，溶解成熟的溶菌酶纤维，将淀粉样 纤维转化成为无定形沉积，抑制溶菌酶纤维 导致 的溶血作用．槲皮素的这种作用与槲皮素一蛋 白间的疏水相互作用相关 ，而与槲皮素的抗氧化 作用无关． 关键词：槲皮素；溶菌酶；淀粉样纤维化；细胞毒性 ；疏水作用 中图分类号 ：R284 文献标志码 ：A 文章编号 ：1674—358X(2013)02—0079—06 蛋 白质或者多肽在某些条件下可产生淀粉样变性形成纤维，沉积于细胞膜，可造成细胞损害，并最终导 致细胞凋亡 ．目前已知有 20多种人类疾病与蛋 白淀粉样沉积有关 ，如 AlzheimerS疾病 、疯牛病 、帕金森 氏病及 II型糖尿病等．虽然与这些疾病相关的蛋白或者多肽序列上没有同源性，高级结构各不相同，但是它 们经聚集形成的淀粉样纤维在显微结构上十分相似 ，都富含 一折叠结构和具有较强的表面疏水性 ，能特异地 与一些化合物结合 ，并改变这些化合物 的光谱特性．蛋 白质淀粉样纤维 的这些性质与其细胞毒性密切相 关[3 ．蛋白淀粉样沉积是否是疾病 的诱 因，目前尚无定论，但 已有的研究显示，抑制蛋 白质淀粉样纤维化 ，溶 解或者破坏淀粉样纤维结构可能是治疗相关疾病的有效途径． 天然多酚化合物是中草药中普遍存在的一类活性成分，具有多方面的药效作用．我们最近 的实验发现， 两种典型的多酚化合物 EGCG(EpigaIIOcatechingallate)[和槲皮素 (Quercetin)[可将蛋 白质淀粉样纤维 转变为无定形聚集体．其他的报道已经证实 ，一些多酚类物质可以抑制蛋 白质的纤维化，并能够破坏成熟 的 纤维结构[7]．这些作用可能与其多酚结构有关 ，也可能与其抗氧化作用或促氧化作用有关． 溶菌酶是一种具有抗菌作用 的小分子蛋 白，其突变体可引起家族性淀粉样变性疾病 ，是最具有淀粉 样纤维化倾 向的蛋 白质之一_8．溶菌酶蛋白家族具有高度 的序列和结构保守性 ，作为该超家族 的成员，鸡 卵清溶菌酶蛋 白同样具有淀粉样纤维化倾 向[g]．本研究采用鸡卵清溶菌酶淀粉样纤维为体外实验模型， 探讨槲皮素对蛋 白淀粉样纤维化以及对淀粉样纤维细胞毒性 的抑制作用 ，以评估天然多酚化合物在这方 面的潜在药效作用． 1 材料与方法 1．1 实验材料 鸡卵清溶菌酶蛋 白、槲皮素、8一anmnonaphtha1ene一1一sulfonicacid(ANs)和 ThioflavinT (ThT)，购 自 Sigma—Aldrich(St．Louis，MO，USA)；其他化合物均为国产分析纯试剂；新鲜全血取 自健康志愿者 ，枸橼酸 抗凝 ． 1．2 实验仪器 ShimadzuUV一2450分光光度计 (Kyoto，Japan)，Perkin-ElmerLS-55型荧光分光光度计 (Waltham， MA，USA)，ShimadzuSPM一9500一J3原子力显微镜 (Kyoto，Japan)，HitachiH一600透射 电镜 (Tokyo，Ja— pan)，ShimadzuLC20A 高效液相色谱仪 (Kyoto，Japan)． 收稿 日期：2013一Ol一28 作者简介：严向阳(1978一)，男，陕西商洛人，硕士，主要从事化学生物学研究 · 79 · 徐州工程学院学报 (自然科学版) 2013年第 2期 1．3 实验方法 1．3．1 溶菌酶淀粉样纤维的制备 鸡卵清溶菌酶 20mg溶于 10mL0．01moL／L