浅谈制作实验动物组织石蜡切片方法和体会.pdfVIP

201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 92．浅谈制作实验动物组织石蜡切片的方法和体会 李华 北京市医疗器械检验所生物相容性检验室 【关键词】石蜡切片：动物组织；手工操作；常见问题；解决办法 病理制片技术是病理学的重要组成部分，一张质量优质的病理切片，能让病理医师对疾 病做出准确诊断。病理制片的环节繁杂，且要面对不同组织，而且从取材、固定、包埋到最 后的切、染、封片，每个环节都至关重要。尤其在一些细小的操作步骤上处理不当，也会影 响制片质量。在开展科研工作时，常需对实验动物组织进行常规的石蜡切片，而实验动物组 织和人体组织具有不同的特点，因此制作实验动物组织的石蜡切片，需要有针对性的选择适 宜的条件，才能制作出优质的组织切片。我们结合本实验室手工操作的经验，提出制片操作 中需注意的细节、问题及解决办法。以期和同仁进行交流和探讨。 l 实验动物组织制片的特点 实验动物组织较人体组织稚嫩柔软，含水分较纤维成分多，但组织疏松，因此在制作组 织切片时，需要根据其组织结构特点，采用不同于人体组织的处理方法，在每个操作程序中 有针对行性的选择适合的方法。由于各实验要求不同，实验动物的病理取材常涉及单个至多 个靶向脏器甚至所有常规实验脏器，就决定了实验动物的制片具有组织种类多、数量大，选 用程序不一等特点。另外一些体积较小的组织标本，常整体包埋，故应对标本的处理更加珍 惜、仔细、谨慎。因此根据组织特点和实验要求选择制片条件和适当的预处理是直接影响切 片质量的因素之一。 2取材固定 在制片过程中，良好的固定是首要步骤也是是制作优秀病理切片的基础。此过程处理不 当易引起自溶，出现细胞核质着色较浅、轮廓不清、程度不等的条状发白区等现象。因此标 本进入此程序时，需要注意以下几个因素。(1)固定液的选择：根据不同组织的性质和不同 的实验观察目的，选用适宜的固定液。一般常用10％中性甲醛但对于免疫组化标本的制作常 用单纯的10％甲醛液固定；用于固定肥大细胞和糖原，AF液的效果则较好【¨。(2)固定要及 m 时：标本不论大小离体后要立即固定(30in内)。(3)固定液的量：固定液的体积应 为组织体积的5．10倍。(4)固定的温度：固定液的渗透力在15℃时为0．2era，35℃时为0．5cm， 因此温度与固定时间长短直接相关。(5)固定时间：一般为24h-48h，标本量多、室内温度 较低时，可适当延长固定时间。(6)当在需要固定多脏器的情况下，可先做全器官初固定， 再进行取材做二次固定。可达到充分固定组织的目的【2J。 (7)在固定过程中需不时轻轻晃 动标本瓶，以保证所有组织悬浮在固定液中。 (8)固定后的组织一定要经过充分水洗，这 样可使染色艳丽。 3脱水 固定好的组织经充分水洗后，才可进入脱水程序。通常采用的脱水剂为乙醇，在此程序 中，需要注意以下细节。 (1)脱水剂梯度浓度需保持：脱水剂使用过～段时间后，需用比 重计测量各级乙醇的浓度，并及时更换，以达到充分脱水的条件。有人提出可只增补100％ 乙醇，即从无水乙醇浓度梯度依次下降。但此时高浓度乙醇中混入了组织块中的脂质和其他 一些杂质，因此逐渐变浓稠。当有水分进入此种乙醇便产生乳白色沉淀，影响脱水效果。即 使用比重计测其浓度变化不大，但此时比重已不能准确反映乙醇的真实百分浓度Ⅲ。因此． 我们认为，脱水剂应用一段时间后，应全部更换新液为好。但可利用脱水剂中加水是否产生 乳白色沉淀的现象来判断是否需要更换脱水剂。(2)脱水时间：从低浓度乙醇在室温下梯 17l 2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 间不可太长。尤其在100％乙醇中不可过长，否则组织块脱水过度，会变脆易碎，组织结构 不能保持完整。本实验室的经验为：组织充分水洗后在80％乙醇中过夜_95％乙醇各 醇的脱水时间。 (3)在高浓度乙醇中的时间；据本实验室经验，组织在高浓度乙醇中时间 过长，对组织的收缩较在二甲苯中时间过长更严重，因此，控制好在高浓度乙醇中的时间尤 为重要。 4透明 透明是关键的一个环节，常用透明剂为二甲苯。此环节需注意： (1)组织脱水后用滤 纸吸干脱水剂再放入二甲苯。如操作过程中将水分和较多的脱水剂带入二甲苯中，不仅会延 长脱水时间和脱水效果，而且其中的水分因比重较二甲苯重，易被组织吸收从而影响透明程