浅谈乳腺癌Her-2基因FISH法检测过程中体会.pdfVIP

2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 怎样才算是一张完美的冷冻切片呢?北京协和医院卢朝晖博士在对北京赛区冷冻切片 总结点评时认为，一张完美的冷冻切片必须具有切片的完整性，厚薄均匀，无折叠和切痕， 组织内无冰晶，保证染色核、浆分明，红蓝适度，组织结构清晰，特别强调冷冻切片立刻固 定，千万不要等待下一张切片，固定时间要充分，足够的苏木素、伊红深染，深分化，不必 晾干，即可封片。要求病理技术人员应掌握制作精良、染色完美的冷冻切片的标准和正确的 操作流程，养成染色后显微镜观察的习惯，以便不断调整流程和总结经验。 总之，要快速制作一张完美的冷冻切片，除了医师要注意取材外，技术人员必须加强责任心， 制片时一定要认真负责，同时应做好仪器的保养。 161．浅谈乳腺癌Her-2基因FISH法检测过程中的体会 张宁 宁夏医科大学总医院病理科 FISH是一门新兴的分子遗传学技术，目前广泛应用于基因组结构研究，病毒分析，产 前诊断，肿瘤遗传，基因组进化等多个领域，其基本原理是用已知标记的单链核酸为探针， 以碱基互补原则与待检组织的单链核酸杂交，形成杂交后的双链核酸。用荧光显微镜观察， 可看到标记的荧光，以此达到诊断目的。 其优势在于： 一、细胞内存在相对稳定的DNA靶。 二、对遗传学改变能逐个进行细胞的定量分析。 三、敏感性高，可提高阳性检测率。 四、可针对性使用靶向治疗药物。 我科自2009年引入FISH法检测乳癌Her-2基因项目后，至今共完成六十例检测任务。其结 果己被本地区及周边省份同级别医院所认同，依托我院得天独厚的发展环境，FISH法检测 乳癌Her-2基因项目在我科的前景将会非常广阔。笔者借此机会将自己所总结的关于FISH 的一些浅薄认识，拿出来供大家探讨，以求共勉。 关键步骤一：前期准备工作。 l、 固定：如果用冰冻组织进行FISH法检测乳癌Her-2基因，则无法制成39m薄片，而且 极易掉片，内源性物质活性也高。所以石蜡组织切片为首选方法，因此固定尤其关键。每一 位病理医师只要在冰冻会诊中接触到乳腺癌标本时，都应该自然而然地想到后续诊断中该患 者有做FISH法检测的可能，从而预留一块标本及时、充分固定，这应当作为病理医师规范 考核的一项内容加以推广。 2、切片：FISH法要求的切片厚度不超过31an，便于在油镜下观察，信号对比清晰，不叠加。 典型的癌灶切片并不困难，大多数组织在取材时或多或少都会带有脂肪，有些浸润癌伴有大 量纤维组织，经脱水后纤维蛋白硬化，切片时极易划伤刀口，造成切片厚度不均匀，影响效 果，笔者平时切片前，先在蜡块上标定部位，将切片机厚设定为29rn或10m，蜡块预冷 3min．5min后，以l转／秒的速度匀速切6-10刀，弃去前4刀，选择较薄、平整的切片捞两 张(其中一张作为对照组)。 3、 脱蜡：我科每遇到FISH法检测时，均选择在周一进行，主要因每周一自动染色机内试 剂都要彻底更换一次。能更好地保证组织脱蜡的质量。 关键步骤二：酶消化处理。 FISH法消化的目的是将包绕在DNA周围的蛋白质消化降解后，以利于探针特异性地结 3ll 2011年全国病理技术新进展研讨台论文汇龋 合在靶点上。蛋白酶K浓度过低则不能达到消化的目的，浓度过高会使组织消化过度，甚 至胞核溶解。 目前．我科所采用的是10-20psYn“的蛋白酶KI作液。将蛋白酶K工作液滴加于组织 上，放入37℃杂交仪内。根据所切组织片厚度，3岬，初级消化6m吣1-3pm．初级消化 4nun．而后，放入2xSSC洗渡中阻斯消化，在荧光显微镜20x10倍镜下观察。因各种荧光 显徽辘品质各异．镜下标准也略有不同，但笔者认为．与对照片比较，消化程度显而易见。 消化后的切片视野中背景为黑色，组织呈现暗绿色．与背景界限清晰。如果对照切片整体明 亮耀眼，说明组织蛋白纤维增生活跃，吸收了大量该波段的澉发光．消化时间要略延长些； 如果对照切片整体暗捩，说明蛋白纤维增生不活跃，经初级清化后．若仍未达到满意效果， 可酌情追加。到目前为止，笔者做FIsH的消化时问一般在7-11分钟．即可达到满意程度。 以上便是笔者所总结的关于FISH的切身体会．兀sH是一门运用不久的新技术，可挖 掘的潜力巨大，有条件的医疗单位均应开展，今后，FISH还会应用到更广泛的领域，笔者 所提供的仅是自己摸索的一条路径而已．希望有志的