抑制胃癌增殖功能性单抗的制备、筛选及鉴定.pdfVIP

维普资讯 中国卫生检验杂志2008年6月第 l8卷 第 6期 ChineseJournalofHealthLaboraloryTechnology，Jun2008；Vol18 No6 1013 【论著】 抑制胃癌增殖功能性单抗的制备、筛选及鉴定 赵西路 ，陈立钊，冉宇靓 ，胡海，孙立新 ，遇珑，杨治华 (中国医学科学院 北京协和医学院肿瘤研究所 细胞及分子生物学研究室，北京 100021) [摘要] 目的：批量制备、筛选 、鉴定抑制人 胃癌细胞增殖的功能性单克隆抗体，为筛选获得与胃癌增殖相关的基因／蛋 白奠定基础。方法：以人 胃癌细胞系 NCI—N87免疫BALB／c小鼠，经脾细胞融合后制备单抗 ，活细胞免疫荧光、免疫组 化、细胞增殖实验、ELISA、Westernblotting等方法筛选鉴定抑制 胃癌生长的功能性单抗。结果：共获得 1012株杂交瘤， 252株能与胃癌细胞膜反应，145株与正常胃组织不反应或低反应。11株单抗在体外能够显著抑制N87的增殖。其中1 株单抗 1B7属IgMK类 ，其识别的抗原的相对分子质量为32kDa。结论：成功获得了多株能够抑制 胃癌细胞增殖的功能性 单抗 ，其中1株单抗识别的抗原可能具有作为胃癌靶向治疗靶标的潜在应用价值。 【关键词】 胃癌；功能性单抗；增殖；靶向治疗 [中图分类号] R730，5 [文献标识码] A [文章编号] 1004—8685(2008)O6—1013—03 Preparation，screeningandidentificationofinhibitionproliferationfunctionalmonoclonal antibodiesofgastriccancer ZhaoXi—lu．ChertLi—zhao，RanYu—liang ， Hai，SunLi—xing，YuLong，YangZhi—hua (DepartmentofCellandMolecularBiology，CancerInstitute，ChineseAcademyofMedicalSciences，Beijing100021，China) [Abstract] Objective：Preparation，screeningandidentificationofmonoclonalantibodieswhichcaninhibitgastriccancercells proliferation may provide a foundation for separation and acquirement of genes or proteins related to gastric cancer growth，M ethods：GastrictumorcellsNCI—N87wereusedtoimmunizeBALB／cmice．Thespleencellsoftlleimmunizedmouse werefusedwitllSP2／0cells．Soas toobtainfunctionalmAbs．antibodiesofeachclonewerescreenedbyimmunofluorescence．im— munohistochemistry，tumorproliferationassay，ELISA andwestern blotting．Results：A totalof1012clonesofmAbwereobtained bythefuseofspleencellswithSP2／0cells．252clonesofmAbcaninteractwiththemembraneofthegastriccarcinomacellsN87 byviableimmunofluorescence．145clon