联合检测滑膜液中葡萄糖6-磷酸异构酶抗原和抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿关节炎诊断中的意义.pdfVIP

反应性关节炎5例、强制性脊柱炎1例、痛风性关节炎1例，所有患者符合其疾病的诊断标 准。 1．2标本的采集：收集患者的滑膜液，每管i00“i分装后放于一80C冰箱备用。 上海北加生物试剂公司，采用双抗体夹心ELISA法。实验步骤按照说明书进行：(1)设GPI Il 标准品4孔及空白孔1孔，其余各孔中加待测人滑膜液样品，每孔加样品1001，置水浴箱中 37C孵育60min，用洗涤液洗板5次后拍干：(2)除空白孔外，其余每孔加入辣根过氧化物酶 u 标记的抗GPI抗体100l，置水浴箱中37C孵育60min，取出用洗涤液洗涤5次，拍于：(3) 每孔加入底物显色液100lal，置室温避光保持15min后，每孔加终止液50ul：(4)结果判断： 采用B10_RAD公司的酶标仪(Model680)，主波长为450nm，副波长为630nm，以GPI标准品 —一■■——一 0．OOmg／L校零，测定各孔吸光度值。以GPI标准品标示的浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐 标，绘制标准曲线。所有患者滑膜液原液检测，以浓度大于0．2mg／L为阳性标准。 抗CCP抗体测定试剂由德国欧蒙医学实验诊断公司提供，采用酶联免疫吸附法(ELISA) 11l，设5个标准品 测定。实验步骤按照说明书进行：(1)滑膜液1：101稀释后每孔加入i00 ul，室 育60min，用洗涤液洗板3次后拍干：(3)每孔中加入辣根过氧化物酶标记的抗体100 11l，室温避光反应 温孵育30min，用洗涤液洗板连次后拍干：(4)每孔加入底物显色液100 30 u min后每孔加入501终止液终止反应。在450nm波长下(参考波长650rlm)读取吸光度 值，以5ru／ml(相对单位)作为正常范围上限。以抗ccP抗体≥5ru／ml为阳性。 1．4统计方法 断的敏感性、特异性，迸行组内比较，计数资料用X2检验，PO．05为有统计学意义。RA组 和非RA组的GPI抗原和抗CCP抗体数据结果以X±S表示，计量资料组间比较采用t检验。 2．结果 2．1 P RA组和非RA组的滑膜液中的GI浓度 RA患者滑膜液中GPI抗原浓度为0．31±0．21mg／L，非RA患者滑膜液中GPI抗原浓度为0．13 ±0．Img／L，GPI抗原在RA患者滑膜液中的浓度明显高于非RA患者滑膜液中的浓度，二 者差异有统计学意义(PO．05)。RA患者滑膜液中抗CCP抗体浓度为1432．4±1901．36RlJ／ml， 非RA患者滑膜液中抗CCP抗体的浓度为401．5±1623．43RU／ml，抗CCP抗体在RA患者滑 R 膜液中的浓度明显高丁．1FA患者滑膜液中的浓度，二者差异有统计学意义(PO．05)。 表1．GPI抗原和抗CCP抗体在RA和非RA组浓度表达情况(x±s) 2．2RA组和非RA组的滑膜液中GPI的敏感性和特异性 本实验以0．2mg／1作为阳性分界点，RA患者共22例，其中GPI抗原阳性患者14例， 阴性患者8例，阳性检出率达63．6％；非RA患者共47例，GPI抗原阳性患者2例，阴性患 的敏感性63．6％，特异性95．7％。本实验以5ru／ml作为阳性分界点，RA患者共22例，其中 抗CCP抗体阳性患者12例，阴性患者10例，阳性检出率达54．5％；非RA患者共47例，抗 cCP抗体阳性患者2例，阴性患者45例，特异性为95．7％，两组间差异有统计学意义(P 0．05)。抗CCP抗体在RA和非RA组的敏感性54．5％，特异性95．7％。 表2．GPI抗原和抗CCP抗体及其联合检测在RA组和非RA组的敏感性和特异性(％) 3．讨论 ketol—isomerase)，