衣藻叶绿体遗传转化研究.pdfVIP

1998年 6期 生物技术通报 7 ] 衣藻叶绿体遗传转化的研究 t 沈桂芳 (中国农业科学院生物中心．北京 10~081) 摘 要 叶绿体遗传转化是近几年发展起来的新领域。本文主要介绍了叶绿体遗传转化的特点、基 本原理和衣藻叶绿体遗传转化的方法与技术；综述了国内外在速方面的研究进展及最新成就，以及 此领域的存在问题和前景展望。 关键词 ， o一 一) 丝篮基垦望 绿悻遗传转化 1 叶绿体遗传转化 叶绿体遗传转化，即以叶绿体基因组为外源DNA受体的一种遗传转化法。众所周知，能 进行光合作用的真核生物细胞包含有三种不同的基因组，它们分g存在于细胞核、叶绿体、线 粒体中，由于三种细胞器都有被膜包裹 ，使得各 自的基因组与细胞质隔离开来。虽然细胞的遗 传物质大部分集中于细胞核，并且叶绿体、线粒体中的一些多肽也 由核基因编码，但对于叶绿 体而言，在光合作用中起至关重要作用的几个光系统蛋白复合体的核心组分 (例 ：PSI、PSII、细 胞色素b／f复合体、ATP合成酶复合体)都曲叶绿体 自身编码。因此，若要透彻研究对 自然界 起决定性作用的光合作用，必须针对叶绿体这一细胞器，在各个层面上进行深入研究，而叶绿 体遗传转化无疑是重要的一种手段。 、 1．1 叶绿体本身作为遗传转化的靶细胞器有诸多方面的独特性： ① 高拷贝的叶绿体DNA分子可以提高外源基因的表达量 每个植物细胞通常有几十至几百个叶绿体，每个叶绿体又通常有几十甚至上百个拷贝的 环状DNA分子，所以植物细胞一般具有相当多拷贝的叶绿体DNAo如果每个叶绿体DNA分 子中都整合有外源基因，那么在叶绿体特异性的强启动子的引导下，外源基因的表达量会大大 提高 【。 ② 可做到外凉基因的定点整合 目前，有十几种擅物和藻类 (例：烟草、黑橙、水稻等)的叶绿体基因组全序列已被测定，遗 传背景比较清楚，通过同源片段的双交换，外源基因可以定点整合到植物叶绿体基因组中。 ③ 外源基因性状稳定快 外源基因的定点整合消除了核转化的 “位置效应”，使同一载体转化的植株具有相同的转 化叶绿体基因组；细胞分裂时，外源基因通过母系遗传直接传给子代，不会出现核基因组孟德 尔分离现象，所以同质化植株的后代应全部是转基固纯系。 ④ 生物安全性高 外源基因不会通过花粉传播给后代，避免了外源基因的环境扩散。 ⑤ 直接表达原核基因L 叶绿体基因组的遗传表达类似原核性基因，大多以多顺反子为转录单位，由一个启动子引 导转录表达；另外，叶绿体基因组CC碱基对含量及翻译所偏爱的密码子都与原核生物相近， 8 生物技术通报 1998年 6期 这有利于原核基 因的直接表达。 另一方面，叶绿体基因组也同时具有真核基因组的特点，如 内含子的存在和RNA编辑现 象。所 以，叶绿体也有可能直接表达真核基因。 1．2 叶绿体遗传转化的基本原理 前已述及，外源基因通过同源片段的双交换，定点整合到叶绿体基因组中。一般地，在构 建的叶绿体表达载体中，外源基因两侧各具一叶绿体的同源片段，当载体通过一定的方法被导 入叶绿体时，同源片段完全或几乎完全取代受体基因组上的同源区域，外源基因也随之插入到 基因组的特定位点。如果同源片段位于基因组的重复序列区内，整合到其中一个拷贝上的外 源基因通过拷贝纠正作用(copyocrrection)使两个重复序列保持相同。转化基因组拷贝进一 步与未转化拷 贝发生分子间重组 ，使转化 DNA在质体 内扩增 ，直到在选择压力下转化子 占优 势。定点整合 的过程如图所示 ： cpDNA 叶绿体 DNA；T—cpDNA：转化后 的叶绿体 DNA IR：反向重复系列； 外源基因；h：同源片段 2 衣藻叶绿体