STIM1%2fOrai1介导的钙离子内流参与气道平滑肌细胞增殖.pdfVIP

中华医学会呼吸病学年会-2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编 书面交流 钙离子来源于两个方面，一是胞浆内质网储存钙离子释放，一是细胞外高浓度钙离子通过细胞膜表 reticulum，ER／SR) 面钙离子通道内流。细胞内肌浆网或内质网(sarcoplasmareticulum／endoplasmic 内的储存钙清空同时也可以开放细胞膜上的SOC(Store—operatedCa”，SOC)通道产生细胞外Ca2+ 内流，称为SOCE(Store—operated 肌细胞钙信号和细胞生理反应过程中发挥了重要作用。研究已发现并证实STIMI(Stromal interactionmolecules 通过调控SOCE参与血管平滑肌细胞的增殖和迁移。但是目前还没有研究证实STIMI／Orail在调控 大鼠气道平滑肌细胞增殖。 方法将雄性SD大鼠支气管平滑肌组织在解剖显微镜下分离，消化酶消化，然后加入含10％胎牛血 清的DMEM培养基置于培养瓶中进行体外原代细胞培养，3—6代细胞用于实验研究。采用Fluo一3／AM 荧光染料进行胞浆内钙离子染色，然后用激光共聚焦系统观察胞浆内荧光强度实时变化，测定细胞 方法检测目的基因蛋白水平表达。AlamarBlue还原法和台盼蓝细胞计数法同时用于检测细胞增殖速 率。特异性shRNA的用于目的基因mRNA干扰沉寂，红色荧光蛋白作为转染标记蛋白，接有红色荧光 蛋白的质粒作为shRNA载体，通过Lipfectamine2000转染入细胞。转染后的细胞经流式细胞仪分 选，回收发红色荧光的成功转染细胞进行mRNA和蛋白水平抑制效果鉴定以及细胞增殖速率检测。 结果研究发现(1)血清刺激的增殖期气道平滑肌细胞与无血清刺激的静止期细胞相比，毒胡萝卜 mRNA 素(Tapsigargin，TPG)激发的SOCE明显增强，并且同时伴有STIMImRNA表达轻度上调和Orail 胞SOCE与血清诱导的细胞增殖。SKF-96365(10M)，Ni”(100M)和BTP一2(100nM)可以 U U 和Orail 滑肌细胞SOCE下降，并且血清或PDGF-BB诱导的细胞增殖速率也下降。沉寂STIMl和OrailmRNA后， SOC通道阻断剂SKF-96365对血清或PDGF-BB诱导的气道平滑肌细胞增殖不再有抑制作用 调控，并在气道平滑肌细胞增殖过程中发挥重要作用。 海南地区2293例支气管哮喘患者 吸入性变应原谱分析 吴海洪，黄奕江 海南省人民医院呼吸内科570311 目的探讨海南地区吸入性变应原的分布情况及其与支气管哮喘发生之间的关系，为特异性免疫治 疗的基础及临床研究奠定基础及提供重要的流行病学依据，并为尘螨过敏原疫苗的研制提供了理论 STIM1/Orai1介导的钙离子内流参与气道平滑肌细胞增殖 作者： 邹进晶， 高亚东， 耿爽， 杨炯 作者单位： 邹进晶(武汉大学人民医院呼吸科 430061 武汉大学中南医院呼吸科)， 高亚东,耿爽,杨炯 (武汉大学中南医院呼吸科) 引用本文格式：邹进晶.高亚东.耿爽.杨炯 STIM1/Orai1介导的钙离子内流参与气道平滑肌细胞增殖[会议论文] 2011