坛紫菜hsp70基因克隆与表达.pdf

第25卷第2期，2012~-4月 宁 波 大 学 学 报 (理 工 版 ) 首届中国高校优秀科技期刊奖 Vo1．25No．2，Apr．2012 JOURNALOFNINGBOUNIVERSITY(NSEE) 浙江省优秀科技期刊一等奖 坛紫菜hsp70基因克隆与表达 刘 伟 ，一，杨 锐 ，，徐丽宁 1,2，张晓龙 1,2，王亚军 1,2孙 雪 1,2 (1．宁波大学 应用海洋生物技术教育部重点实验室，浙江 宁波 315211； 2．宁波市海洋生物工程重点实验室，浙江 宁波 315211) 摘要：HSP70家族是一类最保守和最重要的热应激蛋白家族，在藻类中编码 HSP70家族的基因 也是普遍存在的，从原始单细胞藻到多细胞的大型藻，hsp70基因在藻类适应环境的过程中起 了 重要的作用．为了进一步探讨hsp70基因的生物学作用及其在系统进化中的保守性，研究采用简 并PCR，扩增获得了坛紫菜(Porphyrahaitanensis)hsp70基因片段，随后利用基因组步移获取了 坛紫菜hsp70基因全序列．该基因全长2449个碱基，其中l866bp为编码区域，共编码621个氨 基酸，与同属紫菜 purpurea1)hsp70的氨基酸一致性达90％以上．利用Real-timePCR技术研究 热激及恢复过程 中坛紫菜 hsp70的表达情况，结果表明：坛紫菜 hsp70对热激应答极为迅速， 35℃热激 15min，hsp70rnRNA的表达就提升了15倍；在恢复培养3h后坛紫菜hsp70的表达进 入第二个高峰，表达量提升了48倍，且在随后的过程中始终高于对照值．在整个热激处理中，坛 紫菜HSP70蛋白除了作为胁迫的应激蛋白外，始终作为重要因素参与了防御与损伤修复的过程． 关键词：坛紫菜：hsp70；基因组步移：热激：表达 中图分类号：Q71 文献标识码：A 文章编号：1001．5132(2012)02．0017—09 1962年Ritossa首次发现热激反应(HeatShock 1991年，Michael等5【】获得了脐形紫菜 umbilicalis) Response，HSR)，至 1974年 Tissieres利用 sDs． 质体上编码的 hsp70基因，无内含子，并检测到在 PAGE从果蝇幼虫唾液腺等部位分离得到热激反应 热激情况下，其基因表达增加了 7倍．1992年， 过程 中产生的一组新蛋 白质并命名为热激蛋白 Muller等L6】具体分析单细胞藻莱茵衣藻 (Chlamy- (HeatShockProteins，HSPs)，热激蛋白家族从默默 domonasreinhardtii)编码hsp70基因的结构后发现， 无闻到被广泛关注进而成为研究热点 l【～1．其中 不同于高等植物hsp70基因的结构，它具有6个内 HSP70在所有生物细胞中都有表达，而且在大多 含子，启动子包含有 2个热激元件，另外在第四个 数生物中，HSP70含量丰富．HSP70在进化上高度 内含子还有一个热激元件．可见hsp70基因在不同 保守，种属间同源性高，原核生物和真核生物的 的生物体中具有复杂的表达系统． HSP70有 40％～60％的同源性，而不同来源的真核 生长于潮间带的大型海藻作为海洋生态系统 生物其 同源性为 60％～78％3【】．在逆境胁迫下。 中的重要组成成分，常处于温度、渗透压及辐射的 hsp7o基因充分发挥了分子伴侣的作用，参与新生 剧烈变化中，形成了快速应对突变极端环境的抗 肽的成熟以及蛋白质变性后的复性、降解，维持内 逆应答机制．深入了解其机理，对全面认识生物抗 环境的稳定，具有保护功能[41． 逆机理具有重要意义．紫菜是潮间带重要的经济 近十年来，人们已从多种藻类中克隆获得了 海藻，年产值可达上亿美元，是海藻栽培业产值首 HSP70基因序列．研究者也对多种藻类的 HSP70 位．但是，产量低、性状不稳定、抗病能力下降等 基因的结构和