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2011年 第 46卷 第 6期 生 物 学 通 报 55 初学者做好蛋白质SDS—PAGE需要注意的一些问题 梁 华 孙 群 (上海交通 大学生命 科学技 术学 院 上海 200240) 摘要 针对初 学者在做 蛋 白质 SDS—PAGE时经常遇 到的一些 问题提 出了一些切 实可行 的解 决办法。 关键 词 蛋 白质 SDS一聚丙烯酰胺凝胶 电泳 中国 图书分类号 ：Q5—33 文献标识码 ：B 蛋 白质 SDS一聚丙 烯酰 胺凝 胶 电泳 (SDS— 朝下 。因为玻璃板反复使用后多多少少会有些破 PAGE)是 目前生物学研 究 中最常用 的一种技术 。 损 。如果 随机安装 ，难免漏胶 。3)长玻璃板上 固定 也是我 国高校生物类学科必不可少 的实验 内容 。 的玻璃夹条上面一定要干净 ，如果 留有残胶务必 做好蛋 向质 SDS—PAGE并不 困难 ，但对多数初学 要清理掉 ，否则容易漏胶 。4)玻璃板在灌胶架上 者来讲 ，有时还是要遇到各种各样 的问题 ．比如漏 夹好后 ，一定先要试水 ，不漏后再灌胶 。做法是 ： 胶 、凝胶破碎 、严重拖尾 以及 电泳 中途 断流等 。由 在 2玻璃板 问加满蒸馏水 ，静置 5rain．如液面没 于T作关系 。笔者对蛋 白质 SDS—PAGE的操作十 有 降低或仅有些微 的降低 (小于 2rnn1)方可使 分熟悉 ，愿意针对这些 问题谈谈 自己的体会 。 用 。在不使玻璃板发生位移的情况下小心倾去所 1 灌胶 加 的水 ，残余 的少量水可用长滤纸条吸去 ，然后灌 目前大多数实验室都在使用 Bio—Rad迷你胶 胶 。玻璃板上 留有小 的水滴不必在意 ，一般 不会影 系统或与之类似的系统 ，就 以此为例做些说 明。这 响做胶 的质量 。如果灌胶时玻璃板 中夹有气泡 ．可 套系统设计精巧 ，操作起来十分方便 ，但仍有需要 以用手指尖在气泡部位轻弹 ，使之浮起加 以去除 注 意的地方 。灌胶最怕 的是漏 ，操作不当 ，这是经 其他灌胶时需要注意的地方 ：5)分离胶不要灌得 常发生 的。防漏 的要领 ：1)应该先把 2块玻璃板放 过高 ，要给浓缩胶 留下足够 的高度 。如果试水时稍 存干净平整 的试验 台面上对齐 ，然后再插到灌胶 有些漏 ，分离胶可以灌得稍高些 。6)做水封时可 架 中压牢。不要拿来玻璃板就插到灌胶架 中，这样 于中间部位加水，水流与胶面接触时动作要轻 ．勿 2块 玻璃板往 往对不 齐 。与底 面 的软性封条 间 留 将胶面冲乱。为使胶面水平 ，加水后要左右轻晃几 有 明显的缝 隙而大面积漏液 。2)短玻璃板 的安装 次 。7)分离胶凝 固后 ，将上面的封水倒 出，残液用 有讲究 ：要选择平整 、没有或仅有轻微缺刻 的一边 滤纸条 吸净。8)在浓缩胶 中加梳子时要小心梳子 台灯 与黑藻 之 间的距 离 (cm) 20 40 60 80 1OO 6 进一步探究 空气 lrain 1)利用该实验装置 ，通过 改变 KHCO 溶液 的 柱 增 2min 浓度 ，探究 CO：浓度 的高低对光合作 用速率 的影 加 的 3min 响 。 高度 4min 2)利用此实验装置 ，通过改变试 管 中溶液和 (CI／1) 5min 烧杯 中水 的温度 (注 ：保持烧杯 与试 管内的水温相 5 分