大体积进样电堆积富集用于肌肽类生物活性肽研究.pdfVIP

大体积进样电堆积富集用于肌肽类生物活性肽的研究· 段建平1，黄颖2～，，陈红青1，叶冰玲3，陈国南2 1．福州大学中心实验室，福建福州，350002 huang-ying@fzu．edu．ca 2福州大学化学系，福建福州，350002：3．福建师范大学化学与材料学院，福建福州，350007 当今，毛细管电泳(CE)已广泛用于生物样品中多肽的分离及定量分析。与高效液相色谱(HPLC) 相比，CE具有高效，样品用量少，费用低等优点，但同时CE可承载的样品量只有HPLC的1000分之一， 检测池的光程(UV检测)也只有后者的100分之一，因此作为CE通用的检测方法-UV检测，其浓度检 测限(CLOD)为10-5 10-6mol／L，已不能满足越来越多的对低浓度样品分析的要求。近年来，CE各种在线 富集方法已见报道【1·3】，本文用大体积进样样品富集(LVSS)方法对肌肽类生物活性肽进行在线富集研究。 肌肽类生物活性肽是一类含组氨酸的二肽，广泛分布在脊椎动物体的骨骼肌以及神经组织中，具有抗 氧化，保持生物体酸碱平衡等重要生物学功能。生物体液中这类物质的含量大小可以作为临床上诊断某些 代谢疾病的依据．目前，用大体积进样样品富集主要测定的是阴离子，有关阳离子的报道很少。本文将LvSS (占管体积63％)用于肌肽类生物活性肽的测定，探索了一些因素对富集过程的影响。 P／ACE 1实验部分1．1仪器与试剂l 声波清洗器，PHS一3c型精密酸度计：肌肽、鹅肌肽、高肌肽均为美国Sigma公司产品，其余试剂均为国产 分析纯。 1．2电泳条件l 2结果与讨论2．1常规CZE分离：改变缓冲液的pH考察其对分离度的影响，发现存弱酸范陶内具有良好 的分离度。对pH在5．11—6．34之问进行详细考察，其中pH在5．45—5．78范嗣内均可分开。分别对分离电 压，进样时间以及缓冲液浓度进行考察。最后，我们选定的分离条件是：缓冲液浓度为100mmol／L的磷酸 5．63)，分离电压为8kv，进样时间为10s。在上述最佳条件下三个组分的毛细管电泳分离谱图见 盐(pH 图1(a)。 田1三组分常规czE分离培圈1A璐，2．Car．3．Hear(备组分浓度均为5．Olamol／L) 2．2常规样品膏囊 在不改变电源极性的情况下，增加样品进样时间进行堆积，发现峰宽随进样时间的增加而逐渐增大， 分离度也逐渐下降且峰高不再增加。这是由于存在层流使得峰展宽，同时由于进样塞长度的增加使堆积的 前沿不断向检测窗靠近，导致分离度下降。常规样品堆积(以进样时间为60s计算)，使峰高增大4。5倍。 211 2．3大体积进样样品■集(以EOF为捧除基体的驱动力) 除基体，电堆积富集后可使峰高增大40—60倍，见图2。 2．4线性苑一．检测限和重现性 对1．0”mol／L的三组分连续进样三次，峰高的相对标准偏差(RSD)小于4．O％ 田2大体积进样电堆积。一集后的毛细臂电泳圈1．Alia，2．C盯．3．Hcar(各蛆分浓度均为5．0pmol／L) 参考文献 PXuG J，et [1]ZhangXionga1．，Electrophoresis，2001，22，3567-3572 K，PeterK，KadriV，et 【2】Ruth at—Electrophoresis，2000，21，879·2885 【3】Riaz，A．Kim，B．，Chung，D．S．，Electrophoresis．1999，20，1527—1532． Forthe ofCarnosine-RelatedPeotides Large-VolumeSampleStackingAnalysis in CapillaryElectrophoresis Duan Guo—nan Jian—pi