167.洁净室(区)沉降菌检验标准操作规程.docVIP

赣州亿圆生物药业有限公司 操作标准----质量管理 文件名称 洁净室(区)沉降菌检验标准操作规程 编 码 SOP-ZL-00-167 页 数 5—1 实施日期 制 订 人 审 核 人 批准人 制订日期 审核日期 批准日期 制订部门 质管部 分发部门 质管部 目 的：建立洁净室（区）中沉降菌检验操作规程，保证检验人员操作规范化、标准化，确保洁净室洁净度。 适用范围：适用于洁净室（区）、无菌室的沉降菌的测定和环境的验证。 责 任：质管部、QC人员。 内 容： 1、试剂 营养琼脂培养基 培养基的准备及灭菌见附录A。 2、仪器与用具 压力消毒器 生化培养箱 培养皿 3、操作原理 采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干 时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 4、操作方法 4.1.采样 将已制备好的培养皿按6.4.1.2.的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露， 再将培养皿盖盖上后倒置。 4.2.培养 4.2.1.全部采样结束后，将培养皿倒置于生化培养箱中培养。 4.2.2.在30～35℃培养箱中培养48h。 4.2.3.每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作 赣州亿圆生物药业有限公司 操作标准----质量管理 文件名称 洁净室(区)沉降菌检验标准操作规程 编 码 SOP-ZL-00-167 页 数 5—2 对照培养。 4.3.菌落计数 4.3.1.用肉眼直接计数，标记。 4.3.2.若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计 数。 5、注意事项 5.1.测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 5.2.由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观 察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。 5.3.采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 6、测试规则 6.1.测试状态 6.1.1.沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度、静压差、换气次数、空气流速必 须控制在《洁净区监测管理规程》规定值内。 6.1.2.沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 6.1.3.测试状态有静态和动态两种。 6.2.测试人员 6.2.1.测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 6.2.2.静态测试时，室内测试人员一人。 6.3.测试时间 6.3.1.对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不 少于10min后开始。 6.3.2.对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调正常运行不少于30min后开始。 6.4.沉降菌计数 6.4.1.采样点数目及其布置 6.4.1.1.最少采样点数目 赣州亿圆生物药业有限公司 操作标准----质量管理 文件名称 洁净室(区)沉降菌检验标准操作规程 编 码 SOP-ZL-00-167 页 数 5—3 沉降法的最少采样点数见下表： 最少采样点数目 面 积 ㎡ 洁净度级别 100 10 000 100 000 ＜10 2 2 2 ≥10～＜20 4 2 2 ≥20～＜40 8 2 2 注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积； 对于非单向洁净室是指房间的面积。 在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表： 最少培养皿数 洁净度级别 培养皿数 100 10 000 100 000 14 2 2 6.4.1.2.采样点的布置 采样点的位置依据《洁净区监测管理规程》。 a.工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。 b.可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。采样点位置的详细规则见附录B。 7、计算 7.1.用计数方法得出各个培养皿的菌落数。 7.2.平均菌落数的计算 M1 + M2 + … Mn 平均菌落数：M =─────────── n 赣州亿圆生物药业有限公司 操作标准----质量管理 文件名称 洁净室(区)沉降菌检验标准操作规程 编 码 SOP-ZL-00-167 页 数 5—4 式中： M -平均菌落数； M1-1号培养皿菌