实验三粪检.ppt

实验三 粪检(综合性实验) 1.粪便直接涂片法 2.饱和盐水漂浮法 3.定量透明法(厚涂片透明法、改 良加藤氏法) 4.粪便沉淀法 5.改良酸醚离心沉淀法 一、目的要求 1.掌握各种虫卵的形态鉴别要点。 2.掌握粪便直接涂片法、改良酸醚离心沉淀法的基本技术操作步骤。 3.熟悉饱和盐水漂浮法、定量透明法的基本原理及操作步骤。 4.了解定量透明法每克粪便中虫卵数的计算方法。 受精蛔虫卵 未受精蛔虫卵 脱蛋白质膜受精蛔虫卵 鞭虫卵 蛲虫卵 钩虫卵 肝吸虫卵 姜片虫卵 肺吸虫卵 血吸虫卵 带绦虫卵 二、实验内容 技术操作（自己操作） (－)改良酸醚离心沉淀法 1)取粪便2～4g加入离心管内 2)加入50%盐酸7ml搅拌均匀后,用竹签挑去较粗渣 3)5min后加乙醚3ml,塞紧管口充分摇匀 4)1500rpm进行离心3min 5)倒去乙醚、盐酸层 6)取沉渣涂片后加盖玻片镜检。 (二)粪便直接涂片法 1.器材 洁净无油的载玻片，洁净竹签，盖玻片。 2.操作步骤 1) 在载玻片中央滴1～2滴生理盐水， 2) 用竹签尖端沾取少量粪，均匀涂于生理盐水。 3) 要求所制的粪膜厚度以能透过 粪膜下的印刷字迹为度。镜检时粪膜 上可加盖玻片或不加，先用低倍镜观 察，如果发现可疑虫卵，移至视野中 心，换高倍镜观察。这种湿片一般不 适用于油镜观察。 (二)粪便直接涂片法 三、示教 (一) 饱和盐水漂浮法 1.原理 利用比重较大的饱和盐水(1.20)，使比重较小的虫卵，特别是钩虫卵(1.055-1.080)，漂浮在溶液表面，从而达到浓集虫卵目的。 2.材料 漂浮瓶、载玻片、竹签、滴管、饱和盐水、显微镜。 3.操作步骤 (1)在漂浮瓶先中加少量饱和盐水。 (2)将已去粗渣的待检粪便0.5或1克放在的漂浮杯内中。 (3)用干净竹签将粪捣碎，调匀。 (4)继续加入饱和盐水，边加边搅匀，至漂浮杯口，液面成一弧形而不溢出为止。 (5)用一干净载玻片盖住杯口，接触液面，使粪渣中解离出来的虫卵沾附于载片上，浮聚15分钟。 (6)轻轻提起载玻片，翻转，液面向上，置镜台上依次检查粪液内的虫卵。 (7)镜检时记录每片虫卵计数及虫种。 4.注意事项 (1)盐水的配制一定要饱和。 (2)取黄豆大小粪便，太多太少都影响浓集效果。 (3)玻片要清洁无油，防止玻片与液面间有气泡或漂浮的粪渣。 (4)漂浮的时间须按规定。 (5)翻转玻片时要轻巧、迅速，勿使附着在玻片上的液体滴落。 饱和盐水漂浮法 (二)定量透明法(厚涂片透明法) 1.原理： 采用粪便定量或定性厚涂片，以增加视野中虫卵数，经甘油和孔雀绿溶液处理，使粪膜透明，从而使粪渣与虫卵产生鲜明的对比，视野光线变得柔和，以减少眼睛的疲劳，并可作虫卵定量检查。 2.材料： 聚苯乙烯定量板、刮板；100目尼网、 亲水玻璃纸条、 载玻片。 （3）操作步骤： ①将定量板紧贴于载玻片上 ②将筛网覆盖在定量板上，用刮板取粪便从筛孔上挤溢下的粪便定量板满为止； ③提起定量板，在粪样上覆盖含孔雀绿甘油的玻璃纸条，展平后用压板加压，粪样即在玻璃纸和玻片之间铺成椭圆形； ④ 镜检并作虫卵计数； 计算虫卵数 ⑴将每板虫卵总数乘以24，再乘以粪便性状系数（成形粪便1，半成形便1.5，软湿粪便2，粥样使3，水泻便4），即为每克粪便虫卵数（eggs per gram，EPG）。 注意事项： ①粪膜要均匀铺开，大小约20mm×25mm左右，不宜过厚； ②透明时间要适度（尤对钩虫卵检查，透明时间宜短）。 定量透明法(厚涂片透明法) (四)粪便沉淀法 操作步骤：取粪便30g，放入烧杯中，加少许水，用玻棒调成糊状，再加清水搅拌，通过铜丝网滤入盛满清水的锥形杯内，静置20～25分钟，倒去上层粪液留下沉淀物，加清水至满杯，再静置20～25分钟，倒去上层粪液，如此反复数次，直至上层液清晰为止，取沉渣作涂片镜检。 粪便沉淀法 作业(实验报告) 实验三 粪检(综合性实验) 1.粪便直接涂片法的检查结果报告。 2.改良酸醚离心沉淀法检查结果报告。 3.写出粪便直接涂片法、饱和盐水漂浮法、定量透明法的基本原理及各优 缺点、适用范围有哪些 思考题 1.简述定量透明法的原理及操作步骤虫卵数的计算方法。 2.简述饱和盐水漂浮法的原理及操作步骤、注意事项。 3.简述粪便直接涂片法的基本操作步骤及注意事项。