第八章CornealTissueEngineerin.pptVIP

角膜组织工程 严重的角膜病变和角膜损伤引起的盲性眼疾，居致盲性眼病的第二位，仅次于白内障。 据1991年WHO统计，世界上约有角膜病和眼外伤致盲 者1000万人，每年新增病例150万到200万。 在我国，角膜盲约占双眼盲患者15.38％，约100万。 角膜移植术仍是唯一的复明手段。 我国每年约需角膜10万多个，但角膜供体匮乏，每年 实际的角膜移植手术不足3000例。 因此，寻求可用于人体移植的人工角膜，扩大供体来源，满足患者需求成为迫切需要解决的问题。 组织工程的发展，使人工角膜有可能成为人体角膜移植等效物。组织工程角膜是利用生物材料(如胶原)为活细胞培养的支架，构建组织以替代供体角膜。 现在，科学家已经能够在生物材料上种植角膜细胞进行三维培养，并重建了人工角膜。这种角膜替代物与人的角膜非常相似，而且由于它是由角膜细胞构建的，就避免了非组织材料的缺点而能够替代宿主角膜，它能够做出与人角膜一样的刺激反应。 组织工程人工角膜不但可以用于替代角膜，也在药学领域上有很大的应用前景。 主要内容 角膜的组织结构 角膜的生理特性 角膜的组织工程化 角膜的组织结构 角膜的生理特性 角膜种子细胞 角膜上皮细胞的培养，可来源于眼的正常角膜，以胎儿眼角膜为佳。胎儿角膜细胞的生长扩增能力比成人强，体外培养的人角膜细胞生长速度与供体年龄呈负相关，供体年龄越小，细胞分裂增殖越快。 角膜上皮细胞培养常用植块培养法和分离细胞培养法。有研究结果显示，其细胞的生长是由角膜缘部向中央移动，取角膜缘部进行体外培养，细胞传代次数增加，提示在角膜缘部的上皮细胞可能存在增殖潜力大的角膜上皮干细胞。 角膜细胞因子 生长因子对角膜细胞的培养、生长繁殖，以及与细胞外和细胞间基质的结合有明显的促进作用，其中 碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor, bFGF) 可促进角膜细胞增殖 角膜细胞生长因子 (keratinocyte growth factor, KGF) 可刺激角膜细胞产生多型胶原 转化生长因子 (transforming growth factor-β1,TGF-β1) 可使角膜细胞增殖和迁移，促进蛋白合成 表皮生长因子 (epidermal growth factor, EGF) 角膜的支架材料 理想的角膜支架材料应具备下列特点： 良好的生物相容性。自身及其降解产物对机体无毒性，不引起排斥反应和炎性反应，不致畸变； 材料携带具有生物诱导性的多种角膜细胞生长因子，可诱导自体多种角膜细胞沿材料支架生长繁殖； 支架材料的降解速率与植入角膜细胞形成组织器官的速率相匹配，在支架完成为角膜组织提供模板功能后，可被完全降解吸收、或成为与新生组织相互融和的组成部分； 可按角膜组织的特点和缺损情况进行塑形，形成一定的曲率，达到完善的形态修复； 具有一定的坚韧性和与人体角膜相似的各种物理和化学特性，可加工成型，能形成三维立体结构，为细胞在支架中生长和物质代谢提供足够的空间。 角膜的支架材料 动物胶原和壳聚糖 动物胶原在体外经过酶解或酸解、提纯、分型处理后，动物机体胶原中存在的抗原性物质可被除去。大量的研究结果表明，动物提取的胶原免疫原性低、组织相容性好，可引导角膜细胞粘附和生长，参与受损角膜组织的重建，其降解产物小链段多肽蛋白质和氨基酸可作为组织细胞的营养成分。胶原可从动物中大量提取，来源丰富且价格便宜，因此胶原可作为人工角膜支架的基质材料。 从动物中提取的胶原，虽在组成上与人体胶原相似，但在提取过程中其整体结构发生了变化，提纯后的胶原失去了强度，作为支架基质材料，在体内受胶原酶的作用，极易降解。因此，为了增强胶原的强度和控制其在体内的降解率，加入壳聚糖可弥补这些不足。壳聚糖是一种天然的生物氨基多糖，与角膜细胞间质中的黏多糖有相似的结构，成膜性好、强度高、外观透明，在机体内不被胶原酶降解，而是缓慢地被溶菌酶降解，可调节支架基质材料的降解率。大量的研究结果表明，壳聚糖和胶原是多种人体组织细胞生长繁殖的诱导支架材料和细胞生长基质。 角膜的支架材料 黏多糖 黏多糖是构成角膜细胞外和细胞间基质的主要成分，具有黏弹性和大分子水合性，可促进和引导角膜细胞的生长繁殖，与胶原相结合形成的网状结构对角膜形态和正常生理状态的维持具有重要作用。通过与角膜内皮的结合，形成角膜组