路氏滋燥汤对小鼠颌下腺细胞因子Fas%2fFasL的影响.pdfVIP

中华中医药学会风湿病分会2011年学术年会论文汇编 1．2．2．2造模给药方法 空白对照组：空白对照组背部以生理盐水0．3ml／只假免疫，造模第二天开始给予生理盐水0．5ml／ 天灌胃，两周结束时处死。 模型组：模型组给予生理盐水0．5ml／天灌胃两周，颌下腺抗原+完全弗氏佐剂形成的浓度为500p g／ml的抗原多点注射于动物的背部皮下，总量为0．25ml，头部皮下注射百白破疫苗(百日咳死菌体浓度 为1．1×1011个／m1)0．05ml。～周后同样剂量百白破疫苗在背部注射加强免疫。 低剂量治疗组：低剂量组给药剂量按人用药量的5倍。换算后得279／kg天，灌胃剂量为0．5ml／ 天，两周后处死。免疫法同模型组。 高剂量治疗对照组：高剂量治疗对照组给药剂量按人用药量的10倍，换算后得54g／kg／天，灌胃 剂量为0．5ml／天，灌胃两周后处死。免疫法同模型组。 1．2．3测定细胞凋亡率及Fas／FasL 1．2．3．1流式细胞仪检测颌下腺组织细胞凋亡 g／L叠氮钠(NaN3)的生理盐水洗净血迹和污物， 将留取的颌下腺组织除去包膜和结缔组织，用含0．5 105—1Xi06 用显微剪剪碎后放入生理盐水中，过300目筛网，形成单细胞悬液。调整细胞浓度为5X 用PBS洗涤；将细胞重悬于200ulBindingBuffer；加入lOulAnnexinV—FITC和5ulPI，轻轻混匀，避 光反应15分钟，加入300ulBindingBuffer，在--4时内上机检测。 1．2．3．2Fas、Fasl测定 取动物新鲜颌下腺组织，40％多聚甲醛固定，酒精逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切成6um厚的 滴，混匀后加至切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30rain之间，蒸馏水洗涤。苏木素轻 度复染。脱水，透明，封片。光学显微镜观察。结果判断：Fas、Fasl阳性反应区着色呈棕黄色，胞核 阴性。形态计量学分析：所有标本经苏木素轻度复染后，每个标本随机取5个视野(光镜下放大X400)， 用Leica图像分析系统检测Fas、Fasl在每张切片上表达的面积百分比。 2．结果 2．1颌下腺细胞凋亡的检测 如表l所示，模型组和其他三组相比细胞凋亡率明显增高，有高显著性差异，PO．Ol；模型组和大 剂量组，小剂量组相比也分别有显著性差异，PO．Ol；大剂量组和小剂量组相比无显著性差异，PO．05。 表明SS的发病与异常的凋亡程序启动有关，而路氏滋燥汤对降低干燥综合征小鼠的颌下腺细胞凋亡率有 明显的改善作用。但在早期，这两个治疗组动物所用药物的浓度在改善颌下腺细胞凋亡率方面并没有显 著差别。 表l各组颌下腺细胞凋亡结果(％)(x±S，n=20) 组别 凋亡细胞百分数 49％ 空白对照组 3．95±L 模型组 16．63±2．93％ 大剂量治疗组 7．84±0．91％ 小剂量治疗组 8．Ol±1．10％ 165 中华中医药学会风湿病分会2011年学术年会论文汇编 2．2Fas和FasL检测结果。 如表2所示，与空白对照组相比，其模型组的Fas、FasL的表达显著增高PO．01，有统计学意义： 显著差别PO．01，有统计学意义。可见路氏滋燥汤明显的降低了SS模型小鼠的Fas、FasL表达。 表2各组颔下腺组织切片Fas、FasL的表达结果(％)(z士s，n=20) 3．讨论 SS唾液腺的病理表现主要为淋巴细胞浸润，并以CD4T淋巴细胞为主幢1，这些变化最终导致腺泡及导 管破坏，唾液分泌减少，引起1：3干症状。俞创奇等。副诱导干燥综合征小鼠模型，四周后发现不同剂量组 出现不同程度的淋巴细胞浸润，导管、血管扩张，腺泡萎缩。进一步研究证实，淋巴细胞与唾液腺导管 和腺泡上皮细胞之间的相互作