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黄渤海沉积物真菌分子多样性及新种鉴定 黄渤海沉积物真菌分子多样性及新种鉴定 摘 要 本研究对 2013 年 6 月采集自黄渤海 30 个站位的沉积物样品提取宏基因组 DNA ，利用454 焦磷酸测序技术对ITS1 和ITS2 两个分子标记进行高通量测序， 对有效序列依据 97%相似度水平划分 OTU 。研究真菌在不同海域和不同分类学 水平上的多样性和群落结构。测定沉积物环境理化因子，包括总碳（TOC ）、总 氮（TN ）、C/N 、总磷（TP ）、总硫（TS ）、总钾（TK ）、pH 和平均粒径。通过 偏相关分析，研究真菌多样性与环境因子的关系。通过真菌群落与环境因子的冗 余分析，识别影响黄渤海沉积物真菌群落结构的主要环境因子。 ITS1 焦磷酸测序获得有效序列122,211 条，76.98%的序列可鉴定到属，共发 现3,714 个OTU，290 个种系型，属于257 个属。ITS2 焦磷酸测序获得有效序列 119,776 条，87.91%的序列可鉴定到属，共发现6,676 个OTU，232 个种系型， 属于201 个属。南黄海、北黄海和渤海三大海域之间的OTU 与种系型数量均无 显著性差异。 在目水平上比较不同海域真菌平均OTU 数量差异。ITS1 的分析结果表明， 南黄海真菌OTU 数量极显著高于北黄海和渤海，北黄海极显著高于渤海；而ITS2 的分析结果则表明，南黄海极显著低于北黄海和渤海，北黄海与渤海无差异。 在门水平上比较不同海域同一类群真菌OTU 数量差异。黄渤海沉积物子囊 菌OTU 数量无显著差异。ITS1 分析认为南黄海担子菌OTU 数量显著大于渤海， 而ITS2 分析结果与之相反。ITS1 分析认为球囊菌OTU 数量无显著差异，而ITS2 分析认为渤海和北黄海的球囊菌OTU 显著多于南黄海。 ITS1 空间分布型分析结果表明，南黄海和北黄海沉积物真菌OTU 呈聚集分 布，而渤海沉积物真菌呈随机分布。ITS2 的空间分布型结果表明，北黄海沉积 物真菌OTU 呈聚集分布，南黄海和渤海真菌OTU 呈随机分布；ITS1 和ITS2 空 间分布型结果均表明，三大海域沉积物真菌种系型均呈随机分布。三大海域沉积 1 万方数据 黄渤海沉积物真菌分子多样性及新种鉴定 物真菌Shannon-Wiener 多样性指数无显著差异。子囊菌门粪壳菌纲和座囊菌纲、 担子菌门伞菌纲为优势类群。 同一海域的沉积物样品具有相似的真菌群落结构。调查范围内，纬度由低到 高，各海域真菌多样性大致呈现由高到低的梯度变化，即南黄海、北黄海、渤海 的真菌群落组成复杂度依次降低。影响黄渤海沉积物真菌群落组成的最重要的环 境因子为TN、C/N、pH 。 尽管以ITS1 和ITS2 作为分子标记，在高级分类介元上能得到类似的分类学 结果，但后续多样性和群落结构分析存在一定程度的差异，PCR 扩增的偏好性 是其中最主要的原因。ITS1F/ITS2 因其良好的真菌特异性，因而可以扩增得到更 多的真菌序列；其片段长度更长，信息位点更多，且平均变异程度更高。本研究 结果也表明，在分析真菌群落结构和多样性时，ITS1 优于ITS2 。随着测序成本 的不断降低，同时采用两个片段进行测序分析，互为补充，可能得到更加准确的 结果。同时，应考虑singletons 和doubletons 的处理方法，以减少偶见种对多样 性分析的影响。 此外，本研究采用形态学和分子系统学相结合的方法，对分离自黄海山东沿 岸潮间带海藻（内生真菌）或沉积物