葡萄原生质体分离及瞬时转化体系的建立.pdfVIP

西北植物学报，2015，35(6)：1262—1268 ActaBot．Boreal．-Occident．Sin． 文章编号：1000—4025(2015)06—1262—07 葡萄原生质体分离及瞬时转化体系的建立 舒小娟，温腾建，邢佳毅，卢 龙，胡建芳 (中国农业大学农学与生物技术学院，北京100193) 摘要：为了建立葡萄原生质体进行遗传转化的技术，该研究以葡萄品种‘黑香蕉’的叶片和愈伤组织为材料，分析 纤维素酶和离析酶的浓度与配比、渗透压和酶解时间等主要因素对葡萄原生质体分离的影响，探讨建立稳定、高效 的葡萄原生质体分离与瞬时转化体系，为鉴定目标基因的功能奠定基础。结果表明：(1)葡萄叶片原生质体的分离 mol／L甘露醇溶液中，酶解14h为宜，每克游离产量为4．09× 以3．0％纤维素酶和0．75％离析酶的酶组合，在0．6 10 6个原生质体，活力为83．12％。(2)葡萄愈伤组织原生质体的分离以2．0％纤维素酶和0．5％离析酶的酶组合， 在0．5mol／I。甘露醇溶液中，酶解14h为宜，每克游离产量为6．05×106个原生质体，活力为84．13％。(3)利用该 表明，GFP蛋白表达稳定、清晰。该研究建立的葡萄原生质体制备和转化体系，可以用较少量的质粒DNA获得外 源基因在原生质体内的表达，为葡萄功能基因的研究提供技术支持。 关键词：葡萄；原生质体；叶片；愈伤组织；遗传转化；瞬时表达 中图分类号：Q781 文献标志码：A Isolationof andEstablishmentofTransient Protoplast in L．) ExpressionSystemGrapevine(Vitisvinifera SHU Jianfang+ Xiaojuan，WENTengjian，XINGJiayi，LULong，HU of and 100193，China) (CollegeAgricultureBiotechnology，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing transient basedon ordertoestablishanefficient Abstract：In expressionsystem grapevine usedthe andcallusof the factorsrelatedto effec— mesophyll grape‘Heixiangjiao’toanalyzekey isolating ascelluloseand ofmannitolinen— tivelyprotoplasts，such macerozymeenzymecomposition，concentration SO wasusedasa vehicleto the solution，durationof dissolve，andon．The zyme enzyme protoplast explore establishmentofastable，efficient isolationandtransienttransformation