茂原链霉菌原生质体制备条件的优化.pdfVIP

维普资讯 现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2008，Vo1．24，No．2 茂原链霉菌原生质体制备条件的优化 包莹玲，潘力 (华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510640) 摘要：对茂原轮枝链霉~(Streptoverticilluimmobaraense)~原生质体制备进行 了研究。研究表明在培养基中加入 的甘氨酸有利 于原生质体的释放。茂原轮枝链霉菌孢子悬液在41℃下用2．5me／mE溶菌酶作用4h的效果最好，原生质体形成率与再生率的乘积 可达 24％。 关键字：茂原链霉菌；原生质体；响应面法 中图分类号：Q939．9；文献标识码：A；文章篇号：1673-9078(2008)02-0138-05 OptimizationofProtoplastPreparationfrom SporesofStreptoverticilluim DJ巴，口，．口 BAO Ying-ling，PAN Li (CollegeofBioscienceandBioengineering，SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou5l0640，China) Abstract：ThepreparationsofprotoplastofStreptoverticilluim mobraaensewerestudied．Resultsshowedthat4％ glycinecontaindin culturemedium werepropitioustoreleaseofprotolast．Theoptimalprepraationconditionswereas follows：enzymatictemperature41℃， lysozyme2．5me／mE，enzymatictime4h．Underthoseconditions，theproductofthegenerationrateandregenerationratereached24％． Keywords：Streptoverticilluimmobaraense；Protoplast；Responsesurfacemethodology(RSM) 茂原链霉菌 (茂原轮枝链霉菌Streptomycesmoba— 优化茂原链霉菌原生质体制备条件。 raensis)是生产转谷氨酰胺酶的常用菌种之一，对其 菌株的优化对转谷氨酰胺酶酶产量及酶活性的提高有 1 材料和方法 着极其重要的作用。茂原链霉菌属于放线菌中的链霉 菌属，为严格好气菌、营养菌丝大量分枝，气丝形成 1．1 菌株、酶、渗透压稳定剂 (P液)和培养基 3至多个孢子的链，(G+C)moL％为69％~78％。其孢 菌株 ：茂原轮 枝链 霉 菌 (Streptoverticilluim 子成链、不游动、外包薄层纤维鞘，每条孢子链中有 mobaraense)，本实验室提供 ；溶菌酶 (1ysozyme)：购 3到多个孢子 ，孢子质地光滑 J。 于鼎国公司；P液：按文献l4l；茂原轮枝链霉菌培养 高产菌的选育是微生物发酵的核心，常用手段有 基：按文献l6J。 物理化学诱变及原生质体融合等传统选育方法。随着 1．2 菌株的培养 分子生物学发展出现许多新的分子育种方法，如以原 将于．20℃冻干保存的菌种在斜面培养基中活化 生质体技术为基础，基因改组为指导思想，形成的新 后，转接至含一定甘氨酸浓度的斜面培养基中培养 40 的微生物基冈组改组的分子育种技术川。