5-Fu诱导小鼠气管损伤修复过程中干细胞标志物及信号通路基因芯片及研究.pdf

㈣删 目 录 一、摘要 中文论著摘要…………………………………………………………………1 英文论著摘要…………………………………………………………………7 二、英文缩略语……………………………………………………………………17 三、论文 论文一 前言……………………………………………………………………………18日U舌……………………………………………………………………………18 材料与方法……………………………………………………………………19 实验结果………………………………………………………………………20 讨论……………………………………………………………………………24 结论……………………………………………………………………………25 论文二 前言……………………………………………………………………………26日U舌……………………………………………………………………………26 材料与方法……………………………………………………………………26 实验结果………………………………………………………………………28 讨{仑……………………………………………………………………………35 结论……………………………………………………………………………37 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………47 五、参考文献………………………………………………………………………48 六、附录 综j苤……………………………………………………………………………50 在学期间科研成绩……………………………………………………………61 致谢……………………………………………………………………………62 个人简介………………………………………………………………………63 ·中文论著摘要· 5．Fu诱导小鼠气管损伤修复过程中干细胞标志物及信 号通路的基因芯片研究 ．▲上一—J-- 刖 吾 干细胞(Stemcell，SC)是一类具有无限自我复制能力和向多种细胞分化潜 能的细胞。干细胞根据来源的不同则分为胚胎干细胞和成体干细胞。成体干细胞 是存在于组织中的未分化细胞，该种细胞能够自我更新并能够分化形成组成该组 织的细胞。在适当条件诱导下，可分化出组成该组织的各种细胞类型，替代生理 性衰老细胞，在组织受损时代偿性增殖，能够维持机体的正常结构和功能。近年 来，已发现造血、神经系统、表皮、肝脏、胃肠、气管等处存在成体干细胞，并 证明干细胞与组织修复有密切关系。在成体干细胞的研究中，有学者发现成体干 细胞能分化产生自身组织的各种成熟细胞。成体干细胞如骨髓来源干细胞可向肝 脏、胰腺、肌肉和神经细胞分化；同时肌肉、神经干细胞也可以向造血细胞分化。 这使得成体干细胞的研究越来越受到人们的关注。 我们曾建立5．Fu诱导离体大鼠和人气管损伤修复模型，证实气管干细胞存在 于具有5．Fu抗性的GO期细胞中，并鉴定出气管干细胞标志物ABCG2。还证明了 w叫p．catenin信号通路参与调控气管干细胞增殖分化过程。本研究采用形态学和 免疫荧光染色方法观察5．Fu诱导的小鼠气管损伤修复过程中干细胞向上皮细胞分 化并检测ABcG2的表达变化。 尽管我们的研究已经发现了参与大鼠气管上皮损伤修复过程的两大经典信号 通路，但对于气管干细胞增殖或分化的确切调节机制还不明确，可能还存在着大 量的未知蛋白构成了气管干细胞复杂的调节网络，其中的关键蛋白还有赖于一种 高通量的方法去发现并进行深入研究。因此，本研究又采用了基因芯片的研究方 法，对小鼠气管上皮损伤修复过程中气管干细胞内基因表达进行了分析。这为将 来更深入的研究气管干细胞，用于治疗气管损伤性疾病提供实验和理论依据。 材料与方法 1、制备小鼠气管上皮损伤模型： 收集重约30克左右的昆明小鼠，雌雄不限(中国医科大学实验动物中心提 的气管环，倒置显微镜下观察纤毛摆动良好，于DMEM／F12培养液中加入5．Fu 冲洗几次去除残余5．Fu。对照组用PBS代替5．Fu，其余同实验组。分别于去除5．Fu 精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，制成41xrn厚的