携带白介素24基因的双靶向溶瘤腺病毒特异性治疗胰腺癌的实验的研究.pdf

目录 中文摘要………………………………………………………………………………1 Abstract………………………………………………．．…………………………………………………………5 —1厶—jL一 日U舌………………………………………………………………………………………………………………12 第一部分基因．病毒MUD55．IL．24的构建及鉴定……………………………．．21 引言………………………………………………………………………………．．21 材料和方法………………………………………………………………………．．23 实验结果…………………………………………………………………………．．40 讨{仓…………………………………………………………………………………………………………．．46 第二部分MUD55．IL．24特异性杀伤胰腺癌细胞体外实验………………………48 引言………………………………………………………………………………．．48 材料和方法………………………………………………………………………．．49 实验结果…………………………………………………………………………．．52 讨论…………………………………………………………………………………………………………．．59 第三部分双调控病毒的体内安全性和抑制皮下移植瘤研究…………………．．62 引言………………………………………………………………………………．．62 材料和方法………………………………………………………………………．．63 实验结果…………………………………………………………………………．．66 讨论………………………………………………………………………………．．73 全文总结及讨论……………………………………………………………………．．76 参考文献……………………………………………………………………………．．82 在学发表文章及奖励………………………………………………………………．108 致谢……………………………………………………………………………………………………………．109 论文独创性声明……………………………………………………………………1lO 论文使用授权声明…………………………………………………………………110 万方数据 携带白介素24基因的双靶向溶瘤腺病毒特异性 治疗胰腺癌的实验研究 中文摘要 胰腺导管腺癌恶性程度高，缺乏早期诊断手段，多数患者确诊时无法切除， 即便是根治性切除，五年生存率亦不足20％。而传统的放化疗对胰腺癌作用有限， 目前众多的新一代研究均关注于如何改善胰腺癌的预后。 本课题，我们构建了一种携带白介素24(IL一24)基因的双靶向溶瘤腺病毒 (MUD55一IL一24)，借以用于胰腺癌的实验研究。我们首先删除腺病毒在正常细胞 内复制必需，而在肿瘤细胞中复制非必需的E1B一55K基因，使其能特异性的在肿 瘤细胞内复制扩增。此外，我们注意到多数胰腺导管腺癌高表达MUCl，而正常 胰腺组织不表达或低表达，这一现象提示MUCl基因转录启动子活性在胰腺导管 腺癌细胞中活性较高，利用胰腺癌细胞的这一特性，采用基因重组方法，以MUCl 启动子代替腺病毒复制早期蛋白E1A基因的启动子，从而我们构建了这种能特异 性地在胰腺导管腺癌细胞中复制增殖，溶解肿瘤细胞，而在正常细胞中复制能力 较弱，毒副作用较小的病毒。为了增强这种双靶向溶瘤腺病毒的杀伤作用，我们 将IL-24基因插入腺病毒基因组中构建病毒MUD55一IL一24，随着病毒的复制， IL-24也随之大量表达，从而发挥IL-24强大的抗肿瘤效应。本课题主要经过以 下几方面研究：(1)构建、包装双调控溶瘤腺病毒及携带IL一24基因的双调控腺 研究。 第一部分基因一病毒MUD55-IL-24的构建及鉴定 目的：构建并包装双靶向溶瘤腺病毒及携带IL一24基因的双调控腺病毒 方法：使用TRIzol抽提多种腺癌细胞、非腺癌肿瘤细胞及正常细胞的RNA，以