MMP-3在肢体缺血再灌注后关节软骨损伤中的作用.pdfVIP

MMP一3在肢体缺血再灌注后关节软骨损伤中的作用 摘 要 鹜豹：本礴究采雳大宣兔荦铡螽肢铁盘露灌注．(双)模涎，邋过对肢体 缺盘褥灌注后关节软骨的病理、软骨细胞的凋亡、基质金属拦白酶一3 (MMP3)的表达与分布、软骨内礞白多糖禽量及分布的观察研究，麓在探 讨MMP3在肢体缺血再灌注艏软骨基质降解中的作用以及与创伤后美节软 骨损伤闻的关系。为深入研究艘体断胶再檀l袋磊软骨逐交豹掇铡鞠寻找奏效 豹茨治治疗接摅拯下基磷。 r l方法：35只健康成年新磁兰大白兔，体燕3．0±0．5Kg，建立大白兔左侧 后肢缺血8小时后辩灌注模型。动物随机分为7组，每组5只，分别在肢体 教膝关节漪簇鞠羟髯平螽软臀，4％多聚擎酸露定，季蜡餐背，分到行 关节敬嚣鄹澳骥HE染色，免疫组化SP法测定关节软骨组织内MMP3的表 达与分布，组化sP法对关节软骨内蛋囱多糖染色，TUNEL法测定关节软骨 细胞凋亡情况；另取一部分关节软骨3％戊二醛围定厝制备电镜标本，行透 射电镜和扫描跑镜藏察：欷半胃板蒂l作成球冻切片，淼位杂交法检测软骨缨 蕤内MMP3mRNA豹转录播捷。MMP3mRNA暇位杂交结果和MMP3免疫 组化结果用Tiger920软{牛测定积分光密度值(IOD)，对蛋自多糖免疫组化结 果测定平均光密度值(AOD)，对软骨细胞凋亡情况行凋亡细胞计数。用SPSS 软件进行相应的统计学分析簸理。 结聚：光学显微镜下霹觉肢体{R旱絮关节软蚤袋覆警埋，柱状基缨戆 接刭遣婺赛，大量软骨缨照核偏移、细胞变性坏死；瓣膜缎织内出现教在出 血点及炎细胞浸润。滑膜表面完熬性破坏。IR后期软骨表两粗糙，袭层细胞 有脱落现象，柱状腰细胞稀少、排列紊乱，钙化鼷较对侧稍增厚，潮线蹭鞭、 增多、前移；淆膜t皮细胞增生修复，表蟊较平整，阕庚审出骥大羹豹残绎 维缨稳，潺袋全层增霉，共蠢瘢痰佬犊囊，嚣荚内豹毪缨斑警大多闭塞。电 镜下观察IR早期软骨细胞出现线粒体肿胀、内织网扩张、胞浆内散布大量脂 滴、胞膜溶解、胞核碎裂或固缩等细胞变性坏死现象；软骨表面无定形物质 消失，垄沟变浅。IR后期关节软骨内可见有残存的溶解坏死细胞，并出现成 软骨细胞及新生的软骨细胞；软骨表面垄沟排列消失，凸凹不平，出现细小 表浅的的裂缝并逐渐增宽、加深，胶原纤维裸露。 凋亡检测发现IR1d关节软骨内TUNEL阳性细胞就显著多于对照侧软 骨(Po．01)，3d组达到高峰，阳性染色深，之后有所回落；IR后期阳性细 胞基本保持在稳定的数目，但仍明显多于对照侧(P0．05)。半月板MMP3 mRNA原位杂交显示，在肢体IR后1d阳性细胞较对照侧增多，染色较深， 3d组达到高峰(PO．01)，之后逐渐回落。MMP3在取后的关节软骨各层内 均有表达，1d组关节软骨内MMP3表达相对较弱，3d组则呈现强的阳性， 显著高于对照侧(PO．01)，至1w和2w组渐升高达峰值，之后有所回落， 但8w-12w组表达仍多于对照侧(P0．05)。在IR侧关节软骨细胞外基质内 MMP．3阳性着色深而多，而对照侧关节软骨内阳性染色多限于细胞内，胞外 基质着色少或基本不着色。关节软骨蛋白多糖染色显示在肢体取早期实验侧 与对照侧无明显差异，1w后实验侧蛋白多糖含量开始明显减少(P0．05)， 12w时仅为对照侧的39％。∥ ， 结论： 1、肢体IR早期关节滑膜组织以细胞变性、坏死和组织水肿等改变为主； IR后期，滑膜组织以增生和瘢痕化病理改变为主，可导致慢性滑膜炎的形成。 滑膜功能的障碍必然导致软骨营养供给的不足。 2、肢体IR早期即出现明显的软骨细胞坏死和凋亡，2w后趋于稳定。 ～方面，软骨细胞MMP3mRNA转录增强、MMP3合成分泌增多；另一方 面，软骨细胞合成分泌的蛋白多糖及胶原减少。最终导致蛋白多糖等降解大 于生成，关节软骨基质丢失，表面溃疡形成，胶原暴露，软骨生物力学特性 发生改变，最终促进慢性关节炎的形成。 关键词：缺血再灌注，基质金属蛋白酶，滑膜，关节软骨，软骨细胞， 蛋白多糖，基质降解 Marx contributestothe of Metalloproteinase一3 injury articular oflimbssufferedfrom cartilage