NGF在骨折愈合过程中的基因表达与实验的分析.pdf

中文摘要 NGF在骨折愈合过程中的基因表达和实验研究 摘 要 目的：骨折是1种常见、多发的损伤，近年来许多学者 对骨折愈合的病理生理、康复等方而做出了大量的研究，骨 折延迟愈合或不愈合仍是困扰医学界的难题之一。在临床实 践中人们发现一些有趣的现象，脊髓和颅脑损伤的患者伴随 着的四肢骨折往往可以见到大量的骨痂过度生艮，甚至肌肉 中出现异位骨化，骨折愈合明显快于没有中枢神经损伤的四 肢骨折患者。虽然近年来许多学者在探讨骨折愈合的各种机 制及各种治疗方法进行了大量的研究，但迄今为止尚无一种 完全有效的对加速骨折愈合和防止骨折不愈合或延迟愈合 的方法。 骨折的修复是‘种病理生理反应，是在多种因子参与卜 发现神经调节与骨痂的形成关系密切。在20世纪90年代初 Biurholm发现骨组织中有神经支配，主要分布丁骨髓、骨膜、 骨骺等骨代谢活跃的区域。随后Sisask证明了这些神经由感 觉神经和自主神经组成。从此关于神经系统在骨折愈合中的 作用研究得到了广泛的开展。随着研究的深入，发现并证明 对骨折局部的调节过程，包括神经生长因子的产生，以及神 经肽的作用等。因此在骨折创伤过程中，会激发机体的应急 反应，中枢神经系统的反应则是其中之一，在合并脑外伤的 情况F更是受到不同程度的影响。 近年来随着医学技术的弋速发展，人ffj对于骨折损伤愈 中文摘要 合的研究越来越深入，现在已经从组纵细胞学向分j三水平发 展，对f骨折愈合机理的阐述也更加清晰。神经因素对骨折 愈合的影响也受到很大的重视。基于此，本课题采用神经生 长因子(NGF)对大鼠成骨细胞体外培养和脑外伤合并骨折的 动物模型，通过埘显微镜下细胞形态观察、细胞增值率的测 定、碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定、免疫组化染色观察、 酶联免疫吸附法测定血清NGF含量等方法，分析、揭示NGF 对促进骨折愈合的机制，为临床提供理论依据。本实验具体 分二部分。 1 NGF对体外培养大鼠成骨细胞f卜长影响的研究 方法：本实验采用体外培养大鼠成骨细胞，观察NGF对 成骨细胞增殖的影响，为防止骨质疏松、骨折延迟愈合，甚 至不愈合的临床治疗提供实验依据，以期更好地指导临床。 本实验采用新生健康SpragueDawley人鼠颅骨行成骨细胞培 养，并汇合传代。在细胞培养过程中以不同浓度的NGF 并同时设立无细胞组(A)、无干预组(B)作为对照。分别 于l 活性检测。 结果：碱性磷酸酶含量：在12小时、24小时和48小时， 组于时间卜无统计学意义(P0．05)。 中文摘要 MTT法检测：在【2小时、24小时和48小时汁数时， C1．C3较A、B明显促进成骨细胞增殖，并有统计学意义 丁^时间上无统计学意义(P0．05)。 2骨折合并腑外伤时骨愈合过程中NGF作用的实验研究 方法：本实验建立SD大鼠脑外伤模型，通过酶联免疫 吸附法和免疫组织化学染色，研究骨折合并腑外伤时血清中 5、6周对大鼠血清进行NGF酶联免疫吸附法进行测定，测 定其0D值，于1、2、3、4、5周对骨折局部进行大体观察， 并对标本制成石蜡标本切片，HE染色，光镜下观察；用免 疫组化法测定阳性细胞的平均灰度值并进行图像分析。所有 数据进行统计学分析处理。 结果：酶联免疫吸附血清学检测：N组血清NGFOD值 后第3d血清NGF明显升高，l周后开始下降，5周时降至 在骨折愈合过程中，成骨细胞胞浆有不同程度的NGF 中文摘要 较，有统计学意义(PO．05)。 结论： 1．NGF对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖具有促进作 用。通过与其受体结合提高成骨细胞的活性。 2．NGF随着浓度的升高对成骨细胞的作用呈一定的递 增趋势。 3．脑外伤后骨痂的生长速度增快，骨折的愈合速度明显 高于单纯骨折组。 4．脑外伤后血清中和骨折局部的NGF含量明显升高， 并且二者有一定的相关性。 5．NGF对骨折的愈合过程中有促进作用，在骨折愈合的 各种因素中相互联系。 关键词：神经生长因子：成骨细胞；细胞培养；碱性磷 酸酶；骨折愈合；脑外伤