亲和层析介的制备及其对家蝇gaba受体的分离纯化.pdfVIP

论文题目：亲和层析介质的制备及其对家蝇GABA受体的分离纯化 学科专业：高分子化学与物理 学位申请人：张晓敏 指导教师：任天瑞 摘要■H·，、 acid，GABA)受体是杀虫剂的重要作用靶标。它 丫．氨基丁酸(aminobutyric 的结构与相关农药毒理和抗药性密切相关。因此，分离纯化GABA受体，并研 究其立体结构，对于开发高效、低毒、安全农药和克服害虫的抗药性具有重要 的指导意义。本文以家蝇为研究对象，研究了GABA受体的亲和分离方法。 通过文献调研，总结了GABA受体的分离纯化方法，分析了去污剂对受体 分离效率的影响规律，并利用计算化学的方法，从文献报道的小分子中，确定 亲和层析的配体为R07．1986／1。通过基质活化、偶联和封闭等过程制备了亲和 层析介质，并确定了该亲和层析柱的应用条件。 基质活化：选择Scpharose6B作为亲和层析基质，1，4-丁二醇二缩水甘油醚 6B上含有的环氧基密度 为活化剂，直接连接在基质上。所得活化的Sepharose 为65．27“mol／g胶。研究了活化温度、时间及pH等条件对活化效率的影响。最 6B的最佳实验条件为：5．0 终确定了1,4丁二醇而缩水甘油醚活化Sepharose g 6B、5．0mL0．3 mL moFL的NaOH溶液和1NaBI-h混合，再加入5 Sepharose 0mg mL h。 1,4．丁二醇二缩水甘油醚和5．0DMSO，35℃条件下170 rpm振荡8 6B上的环氧基与R07．1986／1末端的伯氨基 偶联与封闭：活化的Sepharose 反应，将R07．1 6B上，再用lmol／L乙醇胺溶液封闭残 986／1固定在Sepharose 余环氧基，最终R07．1986／1的偶联度为62．09岬ol／g胶。 6B装柱， 亲和层析柱分离：将制备好的亲和层析介质R07．1986／1．Sepharose 分离纯化家蝇脑组织内的GABA受体。通过亲和层析和离子交换层析，目的蛋白 质浓度为7．3 kD、 I幢g／mL，总量为182．5腭。凝胶电泳分析得到了分子量分别为45 50kD和80 kD左右的三条条带，可能为家蝇GABA受体的a、p和丫亚基，与文献 报道的其他生物的对应亚基相近． 本文的创新点在于利用亲和层析方法从家蝇脑组织中得到了GABA受体，并 鉴定了各个亚基的分子量。 关键词：GABA受体：亲和介质；制备；家蝇：分离；纯化 Abstract isthe for y-Aminobutyric concemed acid(GASA)receptortarget many insecticides．ThestructureofGABA is relatedtotheinsecticide