定点突变对八肋仆虫中心蛋白功能及性质的影响.pdfVIP

摘要 中心蛋白是一广泛存在于多种生物体内的蛋白，它属于结合钙离子的EF-hand超家族 reinhardtii中发现的。而且相关研黻明它主 成员。最初，它是在一种绿藻Chlamydomonas 要定位在微管组织中心上，是微管组织进行正常的复制、分裂的一种必需成分。中心蛋白 即四个钙结合位点。随着生物技术的逐步成熟，定点突变成为了科研人员进行科学研究的 有力手段。 本文利用生物技术对八肋游仆虫中心蛋白进行了定点突变，获得较纯的蛋白，并且应 州光谱手段研究丁其部分性质。利用聚合酶链式反应(PCR)技术和基因重组技术对八肋游 仆虫中心蛋白的451位的苷氨酸进行了定点突变，获得了其重组质粒 的可溶性融合表达。融合蛋自GST．M-Centrin菌体经过超声波裂解后得到的上清夜经过 Protease GST亲和层析后用PreScission frPase)酶切，酶切产物再次经过GST亲和层析和 HitrapQ阴离子交换层析两步柱层析纯化后，得到纯度较高的的M．Centrin。 利用紫外光谱和荧光光谱的方法探讨