白地霉GXU0脂肪酶Ⅱ基因的克隆、表达及环十五内酯的合成.pdfVIP

白地霉GXU08脂肪酶II基因的克隆、表达及环十五内酯的合成 摘要 近年国内外对白地霉的研究投入越来越多，白地霉脂肪酶作为未来极 具潜力的生物催化剂其在芳香化合物的合成、环境治理、饲料蛋白、生物 柴油、生物传感器食品加工及制药行业等方面都有着巨大的潜能及开发价 值。特别是在合成环十五内酯方面，由于目前使用的化学合成法存在工艺 复杂、对设备要求高、污染环境、所得率低等问题，而用脂肪酶催化合成 环十五内酯具有化学合成法无法比拟的优势，越来越多的人把目光转向于 生物合成法。因此白地霉脂肪酶具有很大研究价值和商业价值。 本文从本实验室筛选出的脂肪酶高产菌株白地霉GXU08为出发菌株， 不同的大肠杆菌表达载体，并实现了白地霉基因在pET32a(+)中的表达。 清中检测出酶活，用对硝基苯酚棕榈酸酯法测得酶活为17．8I，／mI，， SDS．PAGE检测到66 l(D的目的蛋白和预测的大小基本一致。利用金属镍 亲和层析对表达产物进行纯化。 GPD印耙办“m c绷施托珑lipase 的高温仍有适当酶活。最适pH为9，在抗金属离子方面K+、Ca2+离子对酶 作用(1．4％．10％)。 用纯酶冷冻干燥后制得的酶粉，进行合成环十五内酯的反应，气相色 谱测得有目的产物生成，但含量较低。白地霉脂肪酶作为真菌脂肪酶在国 内仍处于实验室研究阶段，因此本实验为GeD州如姗c口纷黝册脂肪酶的商 品化生产贡献一份力量。此外，该脂肪酶基因在大肠杆菌中实现成功表达， 为白地霉的研究增添新内容，也为白地霉脂肪酶以后的研究及脂肪酶的工 业化生产和生物法合成环十五内酯奠定了一定的基础。 ’ 脂肪酶 克隆表达 环十五内酯 关键词：白地霉GXU08 U SION ClONING，EXPRESAND CYELOPENTADEENAOLIDE SYNT皿SISOFTHE OF LIPASE GENEIIFROM GEOTIUCHUM CANDIDUM GXUO8 ABSTRACT arise ofresearchand Recently about moldat deVelopmem homeand lipase of abroad，G∞护配办“研c口胛旃幽聊lipase懿agreat bacte矗athereis potential Value0naromatic nugedeVelopment coInpounds synthesis， mal