人工纳米氧化锌粒对牙鲆FG细胞和斑马鱼胚胎的毒性及其毒性作用机制.pdfVIP

中国海洋大学硕士论文 人工纳米氧化锌颗粒对牙鲆FG细胞和斑马鱼胚胎的毒性及 其毒性作用机制 摘要 纳米氧化锌(ruZnO)因具有独特的光催化作用、紫外吸收能力和杀菌作用， 已被广泛地运用到人类日常用品中，如纺织品、化妆品、牙膏和抗菌剂等，由其 所引起的生物毒性效应也引起了人们的广泛关注。本文拟利用海水鱼类牙鲆的鳃 rim、80．150 nm和2 细胞系(FG)来比较研究3种粒径的ZnO颗粒(30 gm)的 细胞毒性效应，利用斑马鱼胚胎来比较研究这3种粒径ZnO颗粒的胚胎毒性， 以了解ZnO颗粒的毒性效应与其粒径大小的关系。在细胞毒性检测中，采用MTT 法、乳酸脱氢酶(LDH)检测法和Hoechst33342／PI双荧光染色法及DNA片段 化法，来分别检测这3种粒径的ZnO颗粒对FG细胞的生长抑制、细胞膜损伤和 凋亡诱导能力。在胚胎毒性检测中，观察这3种粒径的ZnO颗粒对斑马鱼胚胎 孵化率和致畸性的影响。为了探讨ZnO颗粒的毒性与其锌离子(Zn2+)释放量 的相关性，本文还研究了ZnCI：对FG细胞的毒性，以及不同处理浓度下3种粒 的团聚效应与其毒性的关系，本文还比较研究了超声波处理和血清对ZnO颗粒 团聚程度及其毒性效应的影响。本文的研究结果为进一步加深人们对纳米ZnO 颗粒的毒性及其致毒机制的了解，为人工纳米材料的环境污染生物检测系统的建 立奠定基础。 MTT分析的结果表明，3种ZnO颗粒都可以抑制FG细胞的生长，而且这 ZnO nlTl、80—150眦和2 种抑制作用具有明显的浓度依赖性和时间依赖性。30 gm 颗粒对FG细胞的24 n／n 80．150m2 Ixm。可见，3种粒径ZnO颗粒对FG细胞生长的抑制作用表现 出了明显的粒径效应，随着ZnO颗粒粒径的减小而毒性增大；而且ZnO颗粒的 浓度越低，这种粒径效应越明显。LDH分析的结果表明，随着ZnO颗粒浓度的 升高，3种粒径ZnO颗粒处理组的FG细胞培养上清中的LDH活性也随之增加， 具有一定的剂量效应关系，LDH相对活性最低在25％左右，最高在50％左右。 中国海洋大学硕士论文 这表明FG细胞的细胞膜的完整性发生了改变，使存在于细胞质内的LDH泄露 到培养基中。Hochest33342／PI双荧光染色的结果也表明，3种粒径的ZnO颗粒 都可以引起FG细胞的凋亡和坏死。随着浓度的增高，每种粒径的ZnO颗粒所引 起的FG细胞的凋亡和死亡的细胞总数都逐渐增加，具有明显的剂量效应关系。 而且，即使每种粒径的ZnO颗粒在高浓度(100和50 gg／m1)时出现较多的死 细胞，但其毒性都是以诱导细胞凋亡为主。在所检测的暴露浓度条件下，3种粒 径的ZnO颗粒虽然诱导了FG细胞的凋亡，但还没有引起基因组DNA的片段化。 nlTI、80．150 三种粒径ZnO颗粒在PBS中的锌离子释放量的检测结果表明30 nnl和2 释放量也逐渐增加。M’丌法检测不同浓度氯化锌(ZnCl2)对FG细胞的细胞毒 性结果表明，ZnCl2对FG细胞具有明显的生长抑制作用，而且随着ZnCl2浓度的 nn-i、80．150 升高，抑制作用逐渐增强，细胞的活性逐渐降低。