人白细胞介素2的原核表达、纯化和初步应用.pdfVIP

摘要 摘要 细胞因子的研究是当今免疫学的重要领域，其在科研、生产、临床研究等方 面都有重要作用。其中自细胞介素是在细胞间的相互作用、免疫调节以及炎症过 程中起重要作用的一类细胞因子。 IL．2l是2000年发现的，是IL．2家族的新成员。近年来研究发现，IL．21主 要由活化的CD4+细胞分泌，尤其是TIll7细胞和Tm细胞。成熟的人IL．2l有4 个螺旋结构，该结构域与其它IL．2家族细胞因子结构有较高的同源性。IL．2l具 有广泛的生物学功能，能有效调节NK细胞、B细胞、T细胞的增殖、发育和功 能活化。IL．2l在临床研究中具有广泛研究，主要为在研究中疾病发生机理、病 程和治疗的关系。然而，由于细胞因子表达、纯化的限制性，IL．2l在体外大量 应用及基础研究仍然受到限制。 本研究构建了rhIL．2l的原核表达、纯化流程，获得纯度合格的目的蛋白， 操作简便、蛋白回收率高。且有效地去除了内毒素，使其能应用于T淋巴细胞方 面实验，具有良好的生物学活性。采用自主构建的B细胞体外培养系统进行活 性评价，本研究获得的rhI【广21能有效促进kG抗体的分泌。与购买价格昂贵的 商品化IL．21相比，本研究获得的rhIL．2l活化的具分泌高浓度抗体能力的B细 胞比例更高(95％，99．4％)。 研究发现，几．21能增强活化的抗原特异性T淋巴细胞的活性，在IGRA中 的应用可以有效增强其对结核的检测。TB—IGRA试剂利用结核杆菌特异性T淋 巴细胞检测结核分枝感染感染。在IGRA的培养试剂中添加rhIL-2l，健康人群 特异性培养管升高的蜊吖水平无明显差异，细菌性检测阳性的结核患者IFN吖 水平升高明显(37％)，细菌学检测阴性结核患者和肺外结核患者中删吖升高 水平无明显变化；在细菌学阴性结核患者中，添加rhIL广2l使两份漏检标本检测 结果阳性(6／8、8／8)。 关键词：人白细胞介素21；生物学活性；记忆B细胞；抗原特异性T细胞 Abstract AbstraCt roleiIlsciefltific Cyto“neshaS锄impon扭t isaclassof caIl cen reSearch．Interleul【in interactions， cytokiIles，wllichregulate 证Ⅱmme respoIlse锄d证naI】衄1ato拶processes． in ofthc几-2 Intedellkin．21 wasdiscovercd newmelllber 2000，a cytoldne is a“VatedCD4十 me of嗽em l secreted fj啪i1 studies y．IIl years，IL一2ma“y by l7celisandTfllcells．IL-2I isaclassI Th cyto“ne出atsi印als ceIIs，eSpeciaIly the l l of IL-2 throu曲ahetefodim撕c-eceptofcomplexconsisting rcceptor(IL一2R) 觚dt：hccom