利用恶臭假单胞生物合成聚羟基脂肪酸酯均聚物.pdfVIP

摘要 摘要 恶臭假单胞菌KT2442 一直被认为是生产含C6～C14 单体中长链聚羟基脂肪酸 酯(PHA)共聚物的一类细菌。本课题通过分子生物学手段，从恶臭假单胞菌KT2442 基因组里敲除编码 3- 羟基脂酰 -ACP:CoA 酰基转移酶 (3-hydroxyacyl-ACP:CoA transacylase) 的phaG 和几个β-氧化途径相关酶基因，如fadB 、fadA 、fadB2x 和fadAx ， 从而构建出的突变菌P. putida KTHH03 。KTHH03 可以生产出中长链PHA均聚物， 包括聚 3- 羟基己酸酯 (poly-3-hydroxyhexanoate) (PHHx) ，聚 3- 羟基庚酸酯 (poly-3-hydroxyheptanoate) (PHHp) 和 接 近 均 聚 物 的 聚 3- 羟 基 辛 酸 酯 poly(3-hydroxyoctanoate-co-2mol% 3-hydroxyhexanoate) (PHO*) 。当敲除它的PHA 合酶基因(phaC1 和phaC2 )之后，带有嗜水气单胞菌 4AK4 (Aeromonas hydrophila 4AK4)操纵子 phaPCJ 的重组突变菌P. putida KTHH08 可以积累聚 3 -羟基戊酸酯 poly(3-hydroxyvalerate) (PHV) ；带有罗氏真氧菌(Ralstonia eutropha ) phaC 基因的重 组突变菌P. putida KTHH06 可以合成聚 3- 羟基丁酸酯(poly-3-hydroxybutyrate) (PHB) ，聚 4-羟基丁酸酯poly-4-hydroxybutyrate) (P4HB) 。所有的均聚物都进行了 气相色谱(GC) ，核磁共振(NMR) ，差示扫描量热法(DSC) ，热重分析(TGA)和凝胶 渗透色谱(GPC) 的检测，它们的平均分子量介于 1.8×105 5 到 16×10 之间，热学稳定 性随着单体侧链长度而变化。P. putida KT2442 突变菌已经发展成为生产多种不同 的PHA均聚物的平台。 关键词：PHB ，聚羟基脂肪酸酯，均聚物，恶臭假单胞菌，β−氧化 I Abstract Abstract Pseudomonas putida KT2442 has been a well studied producer of medium-chain-length (mcl) polyhydroxyalkanoate (PHA) copolymers containing C6~C14 monomer units. In this study, a mutant was constructed from P. putida KT2442 by deleting its phaG gene encoding R-3-hydroxyacyl-ACP-CoA transacylase and several other β-oxidation related genes including fadB , fadA , fadB2x and fadAx . This mutant termed P. putida KTHH03 synthesized mcl homopolymers including poly(3-hydroxyhexanoate) (PHHx) and poly(3-hydroxyheptanoate) (PHHp), together with a near homopol