人工合成芸苔属源六倍体及其稳定性研究.pdfVIP

摘要 摘 要 异源多倍体在植物进化过程中扮演着重要的角色，在生长活力及环境适应性方 面比低倍性物种具有更强的优势。但是，由于生值隔离和染色体稳定性的原因，像 普通小麦和燕麦等高倍性作物在自然界中并不常见。芸苔属在自然界中包含有三个 AABB和BBCC)，其中每一个四倍体物种均来源于两个对应二倍体物种的结合。而 包含有芸苔属三个基本基因组的六倍体物种(丸墟BCC)在自然界中并不存在，因 此人工合成芸苔属异源六倍体材料对于芸苔属生物学及作物育种均具有重要的意 义。 人工合成芸苔属异源六倍体的途径有很多，其中以芸苔属异源四倍体物种与对 后染色体加倍的方法最为可行与高效。本实验室先后对三种人工合成六倍体的途径 进行了尝试，结果显示途径“BBCC×AA最容易获得六倍体后代，其次是“AABB 为人工合成芸苔属异源六倍体材料的主要途径。2004年，利用110份埃芥材料与29 份白菜型油菜进行广泛种间杂交，总共完成405个杂交组合共计40154个杂交花朵， 染色体计数、分子标记筛选等技术对三倍体杂种后代的假杂种进行了排除，总共获 得了5111株三倍体真杂种幼苗。利用秋水仙素滴定茎尖加倍技术，有23．3％的三倍体 真杂种幼苗的整株或分支得到了加倍，总共收获包含192个亲本杂交组合的1190个六 倍体第一代(H1)单株。 六倍体H，代单株的角果育性在株系间及株系内均表现出较大变异，因此选取育 性较好的来源于411个杂交组合的822个Hl代株系作为进一步研究用材料。在Hl代株 系的后代中，进一步进行了表型和育性筛选并选取出1753个H2代单株进行染色体数 目鉴定工作，结果显示六倍体H2代染色体表现出极大的不稳定性。95％左右的H2代 组合。35个杂交组合中，71．4％的组合只产生1个整倍体单株，约有22．9％的组合产 摘要 多于其他组合，这可能是两个亲本特异结合的结果。 六倍体H：代单株的染色体稳定性很低，但随着世代的增加有了很大程度的提高： 在H。代和H。代中分别为23．0％和26．3％。在同一个世代的不同组合中，六倍体单株的比 率表现出较大的变异，这有利于通过不同六倍体组合之间的杂交来筛选染色体稳定 性更高的六倍体材料。伴随着六倍体染色体稳定性的不断提高，其H4代的花粉育性 及角果育性普遍高于H。代并表现出更大程度的变异。此外，H。代中六倍体单株的比率 与H。代及H4代的花粉育性、H4代的六倍体单株的比率均表现出了显著的相关性，表明 了六倍体单株比率向后代的传递性及进一步提升六倍体育性的可能性。 六倍体早期世代中，不仅染色体稳定性和育性有了很大程度的提高，性状表现 也明显不同于埃芥和白菜亲本。在06一07年及07—08年，分别对15个六倍体组合的埃 芥与白菜型油菜亲本及H2代、H3代及H4代的17个田间性状进行了考察。结果显示两 年的数据重复性很好：总共17个性状中，只有06一07年株高、干物重、全株角果数性 状显著高于07—08年，表明六倍体性状的总体稳定性。而六倍体性状在同一年不同世 代之间则未发现显著差异。与双亲性状相比较，六倍体后代的高亲性状比例高达 35．3％，类似埃芥亲本性状比率为32．4％，低亲性状比率为20．6％，类似白菜亲本和中 亲性状比率均为5．9％。此外，我们在08—09年迸～步考察了六倍体H5代的小区产量及 干物重性状，六倍体材料的小区平均产量显著高于其五倍体后代，低于双亲及甘蓝 型油菜对照；六倍体材料的干物重显著高于双亲及甘蓝型油菜，仅略低于五倍体材 料。 为了解六倍体染色体稳定性的调控因素并为六倍体的稳定性的快速提高寻找可 行的途径，本实验利用细胞学与分子标记技术对引起六倍体后代染色体不稳定性机 制进行了解析。细胞学结果显示，六倍体的染色体在H2代和H3代配对不正常，能够 产生大量的落后染色体及染色体提前分离现象，并且能够出现大量的多价体及单价 体现象。在H2代的减数分裂中期，二价体的平均数目仅为22．30，并伴随有大量的多 价体和单价体，而六倍体的染色体配对构型在H。代有了一定的改善，例如二价体的 数目平均提高了1．12，单价体与多价体的数目也有了不同程度的降低。因此六倍体 大量多价体和单价体的出现可能是导致其染色体不稳定的主要因素。此外利用129 对SSR引物分析芸苔属异源六倍体A、B和C三个基因组的稳定性，发现A和C基因组稳 定性远差于B基因组，据此可推断A和C基因组的高同源性可能是导致六倍体大量多价 体及单价体出现的主要原因