恒定链CLIP个片段增强体液免疫效果的比较.pdfVIP

万方数据 摘 要 主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex, MHC)，由紧密连锁的 多态性是高度相关的一组基因组家庭，它们是一个特定的染色体；其编码的基因表 达于不同的细胞表面，在细胞的免疫应答过程中参与抗原的递呈。MHCI 基因和 MHC Ⅱ基因的两个亚科的主要基因MHC 分子家族，在内质网中，γ链三聚体的 [1] MHC II 类α，β-链及其聚合和聚合，形成特殊的九聚体 (αβγ)3 结构 。二十世纪 [2] 七十年代末，长期从事小鼠分子功能性研究的 Jones 等学者 在研究时获得了意外 发现，α、β、γ 三条链并非都是高度多态性，γ 链是非多态性的，此现象在当时所 发现的各种小鼠中都是存在的，从而首次将γ 链定义为恒定链（Invariant chain ，Ii ）。 Ii 是 MHC II 分子的伴侣蛋白，在维持Ii 三聚体和MHC II 六聚体之间结合结构稳 [3, 4] 定性以及在机体免疫应答的过程中的作用异常的明显 。不止于此方面，Ii 的CLIP 在抗原呈递过程中，会最早的结合到MHC II 类分子的凹槽结构中，阻止某些机体 [5] 在内质网中合成的内源性多肽与之结合 ，经过在细胞内的相关物质的转移，Ii 在 特定的环境条件下被一点点的分解掉，最后分解CLIP，使其从MHC II 类分子的结 合凹槽中消失、某些特殊的抗原肽结合到这一结构凹槽中，最终被呈递到特定的免 [6] 疫细胞表面 。近年来有相关学者研究发现，用外源性的抗原肽替换Ii 的CLIP 区， 能够有效的增强免疫效果，这说明Ii 是一直新型的免疫载体。随着研究的深入，Ii 自身的功能和结构以及在免疫应答过程中的活动机理渐渐被人们所证实。 Ii 的胞内结构域，跨膜区和内质网区3 个区域组成，其主要功能是辅助MHC Ⅱ类分子的外源性抗原肽。。其81-216 位的内质网腔区含有CLIP （Class II-associated invariant chain peptide ，81-104 aa）和三聚体区（TRIM, Trimerization ）两个主要片 段。研究表明，在Ii 的CLIP 存在与MHC II 类分子的结合位点（CBS，Class II binding site ）片段。CBS 片段又分为两个功能片段，即与所有多态性MHCII 结构相关的混 合结合位点（PBS ，promiscuous binding site ，81-87 aa）片段和沟槽结合位点（GBS， groove binding site，91-99 aa ）片段。当Ii 的CLIP 与MHCII 类分子结合时，PBS 存在于MHCII 类分子的肽结合沟槽外部，同CLIP 与MHCII 类分子的解离有关， 而GBS 与MHC II 类分子的肽结合沟槽相互作用。 首先，通过对Ii 的序列分析后，将其划分为胞浆区、跨膜区、CLIP 区、三聚 体区，其中CLIP 区又划分为PBS 、GBS 两个区，分段设计引物，同时用实验室前 期筛选的新城疫病毒NDV F 蛋白的优势抗原表位F2 ，通过重叠延伸PCR 技术，克 隆构建出含有F2 抗原表位和不同Ii 片段的嵌合体，将其构建到pET-32a 载体中， 并将单独的F2 抗原表位连接到p