水曲柳(Frainus mandshurica Rupr.)不定芽发生体系与发育机理的研究.pdfVIP

摘要 摘要 水曲柳(Fraxinusmandshurica Rupr．)是我国东北地区重要的珍贵阔叶树种，其材质 优良，树形优美，且抗性较强，具有较高的经济价值和景观价值。本文以水曲柳的下胚 轴作为外植体，对其不定芽和植株再生进行了系统的研究，并利用植物显微、HPLC及 差异显示PCR等技术对水曲柳不定芽再生过程中的组织化学变化、生理生化动态、内源 激素动态及基因差异表达进行了研究，分析和探讨了水曲柳不定芽发育的机理。主要研 究结论如下： 通过成熟种子的下胚轴建立了水曲柳不定芽快速繁殖系统。在MS和WPM两种培 养基上均能够诱导出不定芽分别为(83．3％和80．O％)，但在MS培养基上外植体死亡现象 极为严鼋，而WPM培养基上外植体死亡率低。在MS培养基上，TDZ比BA更能促进 BA+0．05 BA；继代伸长培养基为WPM+10斗MrtM璐A；低盐和添加少量的IBA有利 温室中驯化成活。 通过石蜡制片法，观察组织培养过程中不定芽的彤态发生。培养3d时发现，胚轴切 口处和韧皮部薄壁细胞分裂已启动；培养第6d时，细胞处于分裂非常旺盛的状态，与顶 端分生组织的细胞相似，是典型的分生细胞，排列紧密，细胞质浓、核大、壁薄；9d时， 芽原基形成，其细胞排列紧密，染色较深，细胞核明显。 通过生理牛化指标的研究发现，在水曲柳不定芽再生过程中可溶性糖含量、SOD、 CAT、POD、可溶性蛋白、总酚含量、PPO以及核酸呈有规律的变化动态。这些物质含 量和组分的变化与细胞的旺盛分裂、不定芽再生的启动以及外植体褐化过程密切相关。 可溶性糖、蛋白质含量在不定芽启动过程中呈上升趋势，是不定芽发生的物质基础和能 量基础。POD、总酚含量和PPO含量在褐化的外植体中含罩=最高，表明这些物质的含量 与植物细胞在外植体褐化状态下的逆境反应有关。 不定芽启动及形成过程中，ZT含量保持着较高的水平。ZT的峰值出现在培养开始 后的第6d。ZT／IAA的比值在不定芽的诱导中起着关键作用。褐化程度越高，ABA含量 越高。内源激素水平和外源激素问的平衡对水曲柳的不定芽形成及发育起着蕈要的调节 作用，尤其是激素之间的平衡互作是一个很重要的影响因素。 水曲柳不定芽再生过程中DDRT-PCR的适宜反应体系为：5’随机引物数为1个，退 火温度为40℃，dNTP浓度100 lamoFL。mRNA差异显示结果表明，在水曲柳不定芽发 育过程中基因表达有着很大的差异，表现为时序表达，转录水平上的明显差异主要发生 不定芽诱导的初期。 关键词水曲柳；胚轴；不定芽；激素：差异显示 Abstract 暑宣皇詈詈詈詈昌罩暑詈暑昌鲁量宣皇詈詈詈罩暑鼍詈皇昌暑暑置量墨詈詈詈昌詈暑暑罩鼍皇鲁詈鲁鲁昌詈暑詈詈詈詈兽皇鲁篁皇詈=詈墨詈皇昌篁詈昌詈昌詈暑詈詈昌皇皇詈暑罩詈皇詈暑皇詈昌昌昌詈暑詈暑昌詈暑詈詈皇詈皇詈詈昌詈詈詈詈詈暑暑富I= Abstract Manchurianash(Fraxinusmandshuricaararebroadleaftree inNortheast Rupr．)is species formofcrownandrelativeresistancto China．With stress， highquality high timber,elegant this this isof economicvalueand value．In speciesgreat landscape work，embryohypocotyls