白花丹参对缺血灌注致脑损伤保护作用的研究.pdfVIP

白花丹参对缺血再灌注致脑损伤保护作用的研究 研究生：王晓哲 专 业：神经生物学 指导教师：白 波 教授 张秋玲副教授 中文摘要 目的 观察白花丹参对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑微循环及脑细胞的影响， 探讨它在脑缺血再灌注后对脑组织的保护作用及其可能的机制，为白花丹参 用于缺血性脑血管病的治疗提供实验依据。 方法 1．动物模型制备：采用大脑中动脉栓塞法(middlecerebral artery occlusion，MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。 2．实验动物分组：健康成年SPF级SD大鼠，雌雄不限，随机分为实验 对照组(sham operation miltiorrhiza bge．，alba，I／R+Sal．)。 miltiorrhiza 3．白花丹参提取物的制备：将白花丹参(Salvia bge．f．alba, Sal．)粉碎后，参照药典规定的常规方法制备白花丹参粗制剂。 4．给药方法：取I／R+Sal．组大鼠，参考紫花丹参的用药剂量，于脑缺血 再灌注术后30min灌胃给药，每天1次，用至取材时间，在最后一次给药后 30min取材。 ． dismutase，SOD)的检测：制备脑匀浆， 5．超氧化物歧化酶(superoxide 参照南京建成生物技术有限公司提供的方法进行反应，利用比色法在550nm 处检测OD值，根据公式计算SOD的活性。 成生物技术有限公司提供的方法进行反应，利用比色法在532nm处检测OD 值，根据公式计算MDA的含量。 剂盒提供的操作步骤进行酶促反应，在636nm波长处测定各管OD值，根据 1 公式计算ATPase活力。 nitricoxide 8．内皮型一氧化氮合酶(endothelial 表达：石蜡切片，免疫组织化学染色，显微镜下观察eNOS的表达。 9．基质金属蛋白酶．9(matrix 石蜡切片，免疫组织化学染色，显微镜下观察MMP．9的表达。 学染色，激光共聚焦显微镜下观察ES的表达。 11．脑血流量(cerebralblood 百分比。 transmembrane potential，一般用△’王，m表示)的测定：制备脑组织单细胞悬 23)染色，流式细胞仪(flow 液，罗丹明123(rhodanminel23，Rhl cytometry, FCM)检测细胞内荧光强度，分析△甲m的变化。 13．半胱氨酸天冬酶-3(cysteine—aspirate 达：石蜡切片，荧光免疫组织化学染色，激光共聚焦显微镜下观察Caspase．3 的表达。 incidenceof 14．脑缺血再灌注后脑细胞凋亡发生率(the apoptosis)的测 荧光强度，分析脑组织凋亡发生率的变化。 结果 1．I／R组与sham组比较：脑缺血再灌注后脑组织SOD活力明显降低(尸 前百分比明显下降(P0．01)；脑细胞线粒体跨膜电位在再灌注3h时明显 下降(P0．01)，再灌注1 显升高(尸0．01)，脑细胞凋亡率明显升高(PO．01)。 2．I／R+鼬正组与I／R组比较：脑组织SOD活力于脑缺血再灌注3h时上调 (尸0．05)，于再灌注l