酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼和吉非替尼的肝脏毒性及机制的研究.pdf

酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼与吉非替尼的肝脏毒性及 其机制研究 浙江大学药学院09级药学 硕士研究生： 薛 涛 导 师： 何俏军教授 杨 波教授 中文摘要 目的考察小分子酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼与吉非替尼的肝脏毒性，研究两者的 肝脏毒性的作用机制，筛选寻找有效的肝脏保护剂，为两药的临床合理运用提供 依据。 脏毒性．培养大鼠原代肝细胞，正常人肝细胞L02及Changliver研究Dasatinib对 肝细胞的体外毒性机制。紫外吸收连续扫描检测Dasatinib与GSH的测结合能力． 法检测Dasatinib诱导的凋亡、白噬以及氧化应激相关蛋白表达量的变化．荧光定 5，JNK n 和p38的表达，讨论自噬和凋亡的关系，以及MAPK通路与自噬和凋亡的关系。 荷人非小细胞肺癌A549裸鼠移植瘤模型评价Gefitinib的体内抗肿瘤活性，同时眼 眶采血检测血清AST、ALT和LDH值，肝组织切片HE染色病理学检查，评价 liver研究Gefitinib对肝细胞的体外毒性 Gefitinib的体内肝脏毒性。L02及Chang 机制，M1vr 基因沉默技术沉默Atg 导的凋亡、自噬以及氧化应激相关蛋白表达量的变化。 结果 产生广泛的空泡化，TUNEL染色检测呈现阳性。 liver有明显的 2．Dasatinib在体外对大鼠原代肝细胞，正常人肝细胞L02及Chang 倍碱基对的断裂，形成典型的DNA梯状条带，westenblot结果显示凋亡通路 的效应蛋白cleaved caspase．3和PARP的切割片段都有相应的表达改变，表明 Dasatinib对肝细胞的损伤主要是通过细胞凋亡实现的。 h，200—260 4．37℃GSH与Dasatinib共孵育5nln紫外吸收连续扫描显示GSH 内重要的还原性物质GSH。 磷酸化，磷酸化蛋白呈现先增加后下降的变化趋势，N一乙酰半胱氨酸(NAC) 作为典型的自由基清除剂能部分逆转保护Dasatinib引起的氧化应激。与此同 时，氧化应激的下游，兼有抗氧化应激应答的转录因子Nrf2被解离释放出来， III 洒婆太堂亟±堂僮论塞 生奎摘要 核转位后促进抗氧化基因HMOX．1和NQ01的mRNA转录水平的上调。 6．JC．1染色显示，Dasatinib作用后导致细胞内线粒体膜电位的下降，线粒体肿胀 实验显示，Dasatinib309M能引起线粒体开放性孔道的开放，释放细胞色素c， 级联激活caspase通路，最终引起细胞的凋亡． 7．Dasatinib引起肝细胞氧化应激的同时，还能诱导肝细胞的产生内质网应激(ER 相应的变化，ER stress可以级联caspase的激活并导致肝细胞的凋亡。 liver的进一步研究发现，Dasatinib产生氧化 8．通过对人源性肝细胞L02和Chang 应激诱导凋亡的同时，引起肝细胞发生自噬，并且这种自噬和凋亡是相互伴随 5基因能 的，是一种保护性的自噬，预孵育3．甲基腺嘌呤(3-MA)或沉默Atg 够减弱自噬而加重凋亡。 噬有关．沉默JNK基因，Dasatinib诱导的自噬不发生变化而凋亡增加；沉默 p38基因，Dasatinib诱导的自噬减