抗人B7-1人-鼠嵌合抗体制备及生物学功能及研究.pdfVIP

抗人B7．1人一鼠嵌合抗体的制备及生物学功能研究 中文摘要 中文摘要 目的：在本科室成功构建的抗人B7．1人．鼠嵌合抗体重组表达质粒 表达细胞株CHO．ch．4E5并制备嵌合抗体。进而分析抗体的生物学功能。 方法：(1)采用小量质粒抽提试剂盒提取抗人B7．1人一鼠嵌合抗体的重组表达质 收集培养上清，经流式细胞术(FCM)进行检测。阳性孔细胞再经亚克隆筛选； 合成eDNA，再加入特异性引物经PCR扩增嵌合重、轻链基因；(3)大规模无血清培 养稳定分泌嵌合抗体的CHO细胞，收集上清，经高速离心、超滤浓缩及PBS透析过 夜，采用Protein G亲和层析柱进行分离纯化，Lowry法定量，间接免疫荧光及FCM B7-1分子的结合；(4)将Raji矛lJDaudi细胞与终浓度为10I．tg／ml的ch．4E5共培养，经 细胞体外增殖的抑制作用；(5)针对嵌合抗体的Fc段功能，以人外周血PBMC为效 应细胞，以上述肿瘤细胞为靶细胞，按效靶比20：1混合细胞，加入终浓度10