7-脱氢胆甾醇合成功能模块与底盘细胞的适配性.pdfVIP

张莹等7／．脱氢胆甾醇合成功能模块与底盘细胞的适配性●IIll_■ (7-DHC)inahightiteristhematchbetweenfunctionalmoduleandchassis．Ourstudyfocusedonsolvingthisproblemby combining differentpromotersandyeastchassisto increase 7-DHC production．To optimize the chassisin orderto accumulatezymosterol，thesubstratefor7-DHCsynthesis，weoverexpressedtruncatedHMG—CoAreductase(tHmglp)and squaleneepoxidase(Erglp)，botharekeygenesofyeastendogenouszymosterolbiosyntheticpathway．Inaddition，we knockedoutC-24methyltransferase(Erg6p)andC一22dehydrogenase(Erg5p)toinhibittheconversionofzymosterolto ergostero1．Byintroducing heterologousC一24reductaseunderthreepromoterswithdifferentstrengths，namely TDH3p， PGKlp andTDHlp，weconstructedfunctionalmodulesofdiverseactivities．Nineengineeredcel1sweregeneratedbasedon thecombinationofthesethreemodulesandthreechassis．Theresultshowsthattheengineeredcellcomposedoffunctional moduleregulatedby TDH3p andchassisSyBE 000956hadthehighest7-DHC production，indicatingabettermatchthan — — others．Thisstudyprovidesevidencesforimportanceofmatchand empiricalsupportforrationaldesignofsubsequent researches Keywords： 7-dehydrocholesterol，syntheticbiology,functionalmodule，chassis，fitness 胆 甾相液晶材料在显示 、电磁场检测 、生 醇 C24．还原酶的基因，并将 ERG5和ERG6失 物医学等方面均有着广泛的应用。作为胆甾相 活且 tHMG1基 因被过表达 ，获得 了能合成 液晶材料的重要前体物，7．脱氢胆甾醇 f7-DHC) 7-DHC的酵母菌_6J。荷兰的HohmannHans．Peter 需求量巨大 ，但其来源和产量问题无法满足当 等也通过上调 HMG1的截短基因，失活 ERG5 前 日益增长的需求…。现有的7-DHC生产方法 和 ERG6，并引入脊椎动物来源的甾醇 C24．还 主要是化学全合成，但其工艺流程长、收率低、 原酶，实现了在酵母中生产 7．DHC J。 能耗高、副产物去除过程复杂 ，且易对环境造 酿酒酵母中存在固醇类物质的合成途径。 成严重的污染2【J。已有研究者实现了利用酶促转 作为单细胞真核生物，酿酒酵母不仅拥有转录 化合成 7-DHC，虽然反应温和，但底物与酶的成 后修饰功能，基因工程操作简单 ，便于培养和 本问题成为限制该技术工业化应用的瓶颈L4j。