《农杆菌介导BtCry1Ac、NTHK1双价基因转化烟草植株的研究》.pdfVIP

河南农业科学，2014，43(7)：3l_37 JournalofHenanAgriculturalSciences 农杆菌介导BtCrylAc、NTHKI双价基因转化 烟草植株的研究 杜沙沙，张 旭，王进茂 ，董 研 ，杨敏生 (河北农业大学，河北 保定 071001) 摘要：为探讨多基因植物转化载体p096899中外源基 因BtCrylAc和NTHK1在转基 因植株 中的 表达情况，通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法转化野生烟草，经卡那霉素筛选，初步获得 了10株转 基 因烟草植株 。经 PCR鉴定，证 明 目的基 因 已被整合到烟草基 因组 中。利用荧光定量 PCR和 EIISA分析 目的基 因在转录水平和翻译水平的表达量，并对转基 因烟草株系进行 了抗虫试验和耐 盐性试验。结果表明，目的基因在转录水平和翻译水平分别得到表达，但表达量存在差异，其 中 2号转基 因株系毒蛋白表达量最高，其含量达可溶性总蛋白的0．0285 ；饲虫试验 中，部分转基 因 烟草株系对斜纹夜蛾 的毒杀作用明显高于未转化烟草 ，其中2号转基 因株系的抗虫性最高，饲喂第 6天斜纹夜蛾幼虫死亡率达到 75．56 ，与Bt毒蛋 白表达量相一致 ；在盐胁迫下，转基因烟草的叶 片生长状况均好于对照(非转基 因)烟草 的生长。证 明BtCrylAc基 因和 NTHK】基 因的转入在 一 定程度上提 高了烟草 的抗 虫性和耐盐能力。 关键词 ：烟草 ；BtCryl-Ac基因；NTHK1基 因；抗 虫性 ；耐盐性 中图分类号：S572 Q785 文献标志码 ：A 文章编号 ：1004—3268(2014)07～0031—07 TobaccoTransformationwithBivalentGeneBtCrylAcand NTH K1M ediatedbyAgrobacterium DU Sha—sha，ZHANG Xu，WANG Jin—mao ，DONG Yan，YANG Min—sheng (AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001，China) Abstract：To revealthe expression of exogenous genes BtCrylAc and N THK1 ofplant transformationvectorp096899harboringmulti—genesintransgenicplants，thewild tobaccowas transformed by Agrobacterium—mediated lear disc transformation method．Ten strains of transgenictobaccowereinitially screened outby kanamycin．Then，identifiedbyPCR ，thetarget geneswereintegratedintotobaccogenome．Expressionoftargetgenesintranscriptionandprotein levelswereanalyzedbyreal—timePCR andEIISA ，andthestrainsoftransgenictobaccowerealso testedforinsect—resistanceandsalt—resistance，Theresultsshowedthatthetargetgenesexpressed in the transcription and protein levels，respectively，and thereexisted an expression amount differenceamongthestrains．Thetoxicproteinamountofthe2th strainwasthehighest，which accountedfor0．0285％ oftheIeaftotaIsolubleprot