产甘油假丝酵母胞浆3—磷酸甘油脱氢酶在甘油形成中的作用.pdfVIP

维普资讯 ／ ① 卜 第 18卷弟 3期 』 。，一 无 锡 轻 工 大 学 黼 请 v 18，No3 1999年 9月 埋 fWuxiUnivelrsityo ．艺嶝箭 I蚰讧 Se口l_1999 脱氢酶在甘油形成中的作用 i 陈 王君，王正祥 ，诸葛健 - ‘～ 。 - 一 (无锝轻工大学生物工程学院，江苏无锝 214036) 摘要 ；为了研究胞浆 3一磷酸甘油脱氢酶 (ctGPD，EC1．1．1．8)在产甘油假丝酵母 (Candida glycerolgenesisZhuge)甘油台成机制 中的作用 ，考察了发酵实验过程中ctGPD的活力水平 以及高渗环境对该酶酶活水平和甘油形成 的影响．结果表 明，该菌种 中，ctGPD的表选在相 对低渗的发酵过程 中处于一十较高的水平 ，并在 36h和 60h处分别出现两次峰值 ；高渗环 境可使 ctGPD酶活增加 ，但幅度不太．发酵试验表 明，随着高渗溶质浓度增太 ，可在一定程度 上恢复细胞产甘油 关 键 词 ：甘油 ； 中国分粪号 ：TQ22 以产甘油假丝酵母 (CandldaglycerolgenesisZhuge)为基础 的甘油发酵 生产0]，经 无 锡轻工大学科技工作者历时 30年的不懈努力 ，于七五期 间实现 了工业化 。．甘油台成途径 包括两步反应：1)磷酸二羟丙酮 (DHAP)在依赖还原型辅酶 I(NADH)的胞浆 3 酸甘油 脱氢酶 (cytoplasmicglycerol一3一phosphatedehydrogenase，ctGPD)催化下还原为 3一磷酸甘 油；2)3-磷酸甘油在特异性的3一磷酸甘油酯酶催化下脱去磷酸根转化为甘油．前人的研究 表 明，酿酒酵母中的ctGPD的主要部分为诱导酶，在高渗诱导下酶活大幅提高 ，并伴随有甘 油产率的提高H ]．但对产甘油假丝酵母中该酶在甘油过量合成中的作用 目前尚未见报道， 作者对此进行了初步的探讨． 1 材料 和方法 1．1 菌株 C．glycerolgenesisWL2002—5 无锡轻工大学发酵甘油研究设计 中心保藏及提供 1．2 培养基 1．2 1 种子培养基 葡萄糖 100g／L，尿素 2g／L，玉米浆 10mL／L． 收稿 日期 ：1999—01—09{仕订 日期 ：1999—06—21 基金项 目：国家九五科技基金资助 (96一c03．0303) 作者简开 ：陈 臻}(1974年 5月生)，女 ，江苏无锡 人，硕士研究生 维普资讯 1．2．2 发酵培养基(FM) 葡萄糖 250g／L，尿素 2g／L，玉米浆 5mL／L． 1．2．3 基本培养基 (MM) 酵母氮基 (Difco)6．7g／L，葡萄糖 20g／L． 1．3 胞浆 3一磷酸甘油脱氢酶酶活的测定 罩 ∞一 爱 粤扭熏舞常每 馨监撼 按文献Esl提供 的方法进行．NADH 的摩尔消光系数为 6．2X10(mol·cm)。。，酶活单 位定义为 ：1rain消耗 1 otol的NADH所需要 的酶量为 1个单位．蛋 白质浓度测定用考马 斯蓝 R一250法进行r． 1．4 甘油浓度 ．剜定 按文献 [1o]，用变色酸法进行． 1．5 残糖测定 用蒽酮法进行 ． 1．6 其它测定 pH值测定，用精密 pH试纸测定 ；菌体量测定，640ilm下测定吸光值． 2 结 果与讨论 2．1 ctGPD酶活在甘油发酵过程 中的动态变化 将培养 18h的种子以5 的接种量接入发酵培养基 ，从 12h起每隔 】2h取样，分别测 定pH、菌体量、残糖含量和甘油含量，收集菌体测定胞浆 etGPD酶活．结果如图 1所示．