干红葡萄酒对食饵性动脉粥样硬化的防治作用及机理的研究.pdf

干红葡萄酒对食饵性动脉粥样硬化的 防治作用及其机理研究 摘 要 亡的首位原因。虽然AS的概念已提出100余年，而且国内、外学者对其 发病机理进行了深入研究，但其病死率仍居高不下，可能与其发病机制尚 不十分明确有关。近年来提出的“氧化修饰脂蛋白学说”已越来越被大家 所公认，从而使抗氧化剂在AS防治中的作用倍受关注，其中防止低密度 脂蛋白(LDL)氧化的药物成为防治AS的新途径。 许多抗氧化剂可通过抑制核转录因子(NF．KB)的活化，从而下调与AS 发病有关的细胞因子mRNA及其蛋白的表达，以此发挥其抗AS的作用。 新近研究表明，干红葡萄酒(DRW)中所含多酚类化合物具有较强的抗氧化 特性，从而推测其可能在防治AS中起重要作用。初步研究显示，红葡萄 酒fRW)可抑制球囊损伤后血管内膜的病变，但有关DRW是否影响AS的 进展则报道甚少。而DRW对不同阶段AS的防治作用及其分子生物学机 制的研究目前尚未见报道。本课题拟通过实验证实DRW对不同阶段食饵 性AS是否具有预防及治疗作用，并探讨DRW的抗氧化作用是如何从细 胞、分子、基因调控水平发挥其抗AS的作用，从而为DRW防治AS提供 新的实验佐证和理论依据。 、f本课题主要研究结果和结论如下： 1．应用生化、光镜和电镜病理技术检测发现，DRW能够使血浆TG、 TC、LDL含量显著降低，血浆载脂蛋白A含量升高。受DRW保护的动物， 其AS病变的程度及斑块的性质、脂质浸润崩解程度较轻，斑块内增殖平 滑肌细胞及血管内膜中基质、弹力纤维等结缔组织成分显著减少； AS发 VII 生发展的过程减缓。提示DRW对AS其有一定预防作用。 2。分别采用微量快速测定法秘XO法测定蠡浆MDA含整帮巍浆SOD 活性及应用化学发光法测定血浆总氧自由蒸捕狱抗氧化能力fTRAC)的研 究结采表明，DRW具有较强的抗氧化能力，能够使血浆MDA含照明照降 低、盎浆SOD淫牲与盘浆TRAC提麓，扶磊使AS瑟覆过氧讫损伤减轻、 病变中的泡沫细胞生成减少。 。 3．经免疫缀化、原位杂交及RT*PCR检测发现，不同阶段AS斑块组 织MCP．1署雾PKCa静表达是弱瀚萑、阳性和强阳性三种不潮的强弱程度； EMSA法测得其细臌核蛋囱NF—K B活性呈时阗依赖馊增强。提示AS缓 织的细胞核NF*K B活化及McP．1、PKCa表达上调，可能参与了AS的发 病过程。 霹。DRW能够显蓉掷剁不同除段AS时懿盘浆MDA毂产=耋及茭盎警维 织细胞核NF．K B活化，从而显著下调其MCP．t和PKCa的mRNA与蛋 白质表达，提示DRW可通过减少MDA的产生而抑制NF．KB的活化、下 谖MCP。l魏PKCa黪表达，放露疆捧AS翡缝缓损揍，延缓AS静发生发 展。 5．已形成的AS斑块组织内的MCP．1和PKCa表达上调，其细胞核蕉 鑫NF．KB静活经疆鬣舞裔。DRW剽对己形成静AS斑块其有鞠驻的消退 作用，并对其MCP．1和PCKa的表达及NF。KB的活性均具骞显蓑的攒制 作用。 6．X／XO掰诱导的氧自由基能够谶著德进体外培养兔主动脉平滑肌细 腿(VSMC)毂增蹙；免疫缨藏纯学检测结果显示，其增殪缨胞核获爨(PCNA) 的表达增强、阳性细胞数明显增多。DRW中的有效成份一自藜三醇(RESl 能够显著抑制X／XO所产生的氧自由蒸对vSMC的3H．TdR掺入及MTT 摄取秘钱澈熬键进终翅，其PCNA静鬻毪缓整数鞠显减少、寝达黧度显著 减弱。提豕RES能够照著抑制氧自由基对血管壁SMC增殖的促进作用。 7．采用免疫细胞化学、原位杂交、RT．PCR及EMSA四种方法，检测 VIll 与蛋白表达及细胞核NF。kB活性的影响。结果发现，其MCP．1和PKCa的 mRNA与蛋白表达上调，同时其细胞核NF．K B活性呈剂量依赖性增强。 提示X／XO所产生的氧自由基能够使VSMC的NF—kB活化，从而上调其 MCP．1和PKCa的表达。 8．采