《化学诱导表达载体pKIGW在拟南芥中的应用 Application of Chemical Inducible Vector pKIGW in Arabidopsis》.pdfVIP

贵州农业科学2013，41 10 ：11～13 Guizhou Sciences Agricultural 化学诱导表达载体pKIGW在拟南芥中的应用 丁博1，钟思林2，王俊斌3，李明1，谢晓东h 1．天津农学院农学系，天津一布里斯托环境变化对作物影响研究中心，天津300384；2．美国康奈尔大学，Boyce Thompson植物研究所，美国纽约14853；3．天津农学院基础科学系，天津300384 [摘 要]为了评价pKIGW载体在模式植物拟南芥中的可用性和稳定性，利用拟南芥转基因纯系植 株，对其施加诱导物后，进行GUS染色并进行实时定量PCR试验。结果表明：GUS染色后发现转基因植株 幼苗各器官均被染成蓝色，实时定量试验证明，目的基因在地塞米松诱导后，表达水平急剧上升。结论：该系 统可精确控制目的基因的表达，基因功能分析的结果更可靠，是理想的基因功能鉴定表达载体。 [关键词]pKIGW；地塞米松；化学诱导；拟南芥 [中图分类号]S131；Q786 [文献标识码]A icationofChemicaIInducibleVectorIGWi13 Appl pK Arabidopsis DING B01，ZHONGSilin2，WANGJunbin3，LI Min91，XIEXiaodon91。 ResearchCentrethe Environmentalon 1．Tianjin-Bristol for Effectsof ChangeCrops，Departmentof InstitutePlant Agronomy，TianjinAgriculturalUniversity，Tianjfin300384，China；2．BoyceThompson for Research，Cornell Fundamental University14853，USA；3．Departmentof Sciences，TianjinAgricultural 300384，China University，Tianj7in GUS andreal—time PCRofinduced Abstract：The staining quantitative transgenicArabidopsisplants wereconductedtoevaluatethe and of vectorin results availabilitystabilitypKIGW Arabidopsis．The that showedalltissuesof cameintoblue．Real—timePCRindicatedthat transgenicseedlings targetgene increased tothoseofcontrol after were expressionsharplycompared plantstransgenicseedlingschallenged dexamethasone．Theseresultsdemonstratedthatthe of and can by expressionstargetgene reportergene bewellcontrolledchemicalinducerand vectoriSanideal for by pKIGW expressionsystemprecise characterizationof function． gene Key 转基因植物中目的基因的组成型超量表达，通 由地塞米松诱导的pOp6／LhGR系统来源于转 常会对植物生长发育有害，并且在进行一些生理和 发育方面的研究时需要目的基因的短暂表达。目 前，人们对特异表达启动子的研究和应用越来越重 而形成的一种化学诱导系统。pOp启动子的乳糖操 视，已发现的特异型启动子主要包括组织器官型启 纵子序列增加到6个，此系统在地塞米松存在的情 动子和诱导型启动子[1]。其中，诱导型启动子平时 况下被诱导而使目的基因得以转录。LhGR系统只 不启动转录或转录活性很低，但在某些特定的物理 需2#mol／L地塞米松即可达到最大诱导水平，半 或化学信号的刺激下，转录活性能够显著地提高[2]。 诱导水平需要0．2“mol／L在培养条件下，需要每 例如，光、温度等的诱导启动子和植物激素诱导表达 5～7d替换10／卫mol／L诱导物来维持最大诱导水 的启动子等。诱导型启动子使得特定基因的转录更 平L7J。此系统是一个相对比较新的系统，已成功在 为灵活，具有时空性，可以使目的基因在植物体内不 细胞分裂素生物合成基因的诱导表达RNA干扰、 同部位和植物发育的不同阶段进行表达[3]。 转录