甘草细胞生物反应器连续培养研究.pdfVIP

甘草细胞生物反应器连续培养的研究 摘 要 甘草在世界药用历史悠久，在中国中医理论系统里更是占据着重要地位。目前，甘草 面临严重的资源问题，利用植物组织培养和细胞培养等现代生物技术对甘草等药用植物进 行研究迫在眉睫。而用生物反应器进行药用植物细胞培养生产次生代谢产物也显示出大规 模工业生产的巨大潜力。 本文在前人的基础上研究改进设计了一套用于药用植物细胞培养的生物反应器连续 培养系统。在对这套连续培养系统进行了细胞截留效率、沉降效率以及氧传质系数等主要 指标的测试后，对该生物反应器系统的性能有了较为全面的描述。实验进行了胀果甘草愈 伤组织诱导和悬浮细胞系的建立及培养，并对甘草细胞进行了摇瓶培养，生物反应器分批 式培养以及生物反应器连续灌注式培养三种不同方式的培养。 实验发现，胀果甘草诱导愈伤组织的最优外植体为下胚轴，适宜培养基：MS+BA 1．0mg／L+2，4．D2．0mg／L。，甘草细胞培养培养基初始培养基为：MS+BA2．0mg／L+NAA 0．4mg／L+IAA 草细胞培养中常出现的细胞褐化问题，添加500mg／L的水解酪蛋白，发现对细胞的生长有 明显作用。 对比三种培养方式，并分别测定了各培养过程中的细胞生长动力学曲线，营养消耗动 在整个生长过程中最高生长量(鲜重)为106．39／L，是接种量的13倍以上，在培养的后期， 营养物质几乎全被消耗。 甘草细胞的生物反应器培养，生长停滞或者生长抑制现象不明显，从培养的4-6d开 始，就进入了指数生长期。生物反应器分批式培养在培养21d的时候达到最大生物量，鲜 重和干重分别为191．3∥L和15．8g／L。生长速率和比生长速率分别在第15d和12d达到最 大。但是从培养的18d开始，由于培养液里营养的消耗，细胞生物量和有毒物质的积累， 细胞生长减缓，细胞生长速率和比生长速率也出现小于O。 而生物反应器连续培养与分批培养方式相比，不仅鲜重和干重分别达到了288．59／L和 18．49／L。而且由于连续的营养供给和废液排出，细胞生长受到的反馈抑制作用的现象得到 明显改善，细胞生长速率没用明显减缓。细胞生长的最高生长速率和比生长速率出现在培 养的第12d和9d，而且到培养的第21d以后生长速率和比生长速率基本趋于平稳，没有 出现小于0的现象。而且，在三种培养方式的最高生长速率比较来看，连续灌注培养高于 分批培养20个百分点，高于摇瓶培养33个百分点。说明初步实现了植物细胞的连续培养。 本文的特色和创新在于设计了一套用于植物细胞连续培养的生物反应器系统，并以 本系统基础，对胀果甘草进行了三种培养方式的悬浮细胞培养。比较得出所设计的植物细 胞生物反应器连续培养系统的优势，为甘草细胞的生物反应器放大培养和大规模商业化生 产提供参考和依据。 关键词：甘草，悬浮细胞，生物反应器，连续培养 n of Cellsin StudiesontheContinuousCultivation Glycyrrhizainflate PerfusionBioreactor Abstract the of medicinal a inthe underconduction Licorice，for use，has longhistory world．Especially Traditional is to insufficient Chinese a Medicine，Licoricesignific