OX40OX40L分子在B6MRLFaslprJ狼疮小鼠免疫病理中的作用机制.pdf

OX40/OX40L 在B6. MRL-Faslpr/J 狼疮小鼠免疫病理中的作用机制 中文摘要 中文摘要 系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE ）是一种综合性的系统性 自身免疫病，以产生大量自身抗体形成免疫复合物沉积于各组织器官并导致其严 重损伤为特征，同时伴有慢性炎症，但致病机制尚不清楚。B6. MRL-Faslpr/J （简 称B6. Fas ）狼疮小鼠是一种以lpr基因突变导致Fas分子缺陷，从而出现异常T细胞 增殖、淋巴结增生、脾肿大、大量抗DNA抗体和肾小球肾炎为特征的SLE动物模 型，因其发病症状与人类SLE相似，近年来被广泛用于SLE发病机制以及病情发展 相关的研究。 OX40/OX40L是一对重要的协同刺激分子，属于TNFR/TNF超家族，OX40主 要表达于活化的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞上，OX40L表达于活化的抗原提呈细胞， 如树突状细胞（DC ）、B细胞等，该信号在T细胞的活化、增值以及抑制凋亡过程 中发挥着至关重要的作用。近年来的研究发现，SLE患者的外周血中CD4+ T细胞上 OX40 的表达量明显高于健康人，在狼疮性肾炎患者的肾脏活组织切片检测中，则 发现大量OX40L的表达，因此推测，OX40/OX40L与SLE的发生、发展有着密不可 分的关系。 本研究以B6. Fas狼疮小鼠为SLE模型，采用流式细胞术检测其脾脏T细胞和抗 原提呈细胞上OX40和OX40L表达，旨在通过动物疾病模型探讨OX40/OX40L信号 在SLE发病机制中的作用。 第一部分 OX40 和OX40L 分子在不同病理阶段B6. MRL-Faslpr/J 狼疮小鼠脾 脏中的表达及意义 【目的】检测B6. MRL-Faslpr/J 狼疮小鼠脾脏组织中CD4+ T 、CD8+ T 细胞， 以及CD19+ B 细胞、CD11b+ 细胞上OX40 和OX40L 的表达，分析其与SLE 发病 的相关性。 【方法】实验组为B6. Fas 狼疮小鼠12 只，按周龄分为三组（12 周、20 周、 28 周），每组4 只；对照组为C57BL/6J 小鼠12 只，同样按周龄分为三组（12 周、 20 周、28 周）每组4 只。为了分析小鼠肾脏损伤程度，采用Albustix 试纸法检测 小鼠24h 尿蛋白量；采用HE 染色的方法检测肾脏血管周围淋巴细胞浸润；通过荧 I 中文摘要 OX40/OX40L 在B6. MRL-Faslpr/J 狼疮小鼠免疫病理中的作用机制 光染色检测IgG 沉积。并利用流式细胞仪检测技术对小鼠脾脏CD4+ T 和CD8+ T 细胞以及CD19+ B 细胞、CD11b+ 细胞上OX40/OX40L 的表达水平进行分析；另 外，采用免疫组化检测小鼠肾脏组织中OX40 和OX40L 的表达；统计学方法分析 不同组间OX40/OX40L 分子表达的差异；检测数据用SPSS13.0 软件进行统计学处 理，组间比较采用t 检验分析，p 0.05 为差异具有统计学意义。图表利用GraphPad Prism 5.0 软件绘制。 【结果】（1）实验组20 周龄小鼠伴有异常升高的蛋白尿（++~+++ ）、28 周 龄小鼠蛋白尿含量进一步升高为++++ ，实验组12 周龄及对照组均为≦ + 。（2 ） 对照组和实验组12 周龄小鼠的肾脏中基本无IgG 沉积，血管周围也无明显淋巴细 胞浸润，随着周龄增加IgG 沉积愈明显，浸润的淋巴细胞数量也逐渐增多，28 周 龄小鼠IgG 沉积量最多，肾脏血管周围淋巴细胞浸润程度最严重，达到3 级。（3 ） 与对照组相比，实验组12 周龄小鼠T 细胞上OX40/OX40L 的表达无显著上调。实 验组20 周、28 周龄小鼠CD4+ T 细胞上OX40 和OX40L 表达水平以及共表达率明 显升高，CD8+ T 细胞上OX40 表达水平无显著差异，OX40L 表达水平有一定程度 的异常升高；并且实验组28 周龄小鼠T 细胞上OX40/OX40L 的表达水平高于实